久效磷农药对斑马鱼性别分化的影响及机制研究-生态学专业论文.docxVIP

{JiIII {JiIIIrl l rlll l lll flit fl flI {Y1 926730 久效磷农药对斑马鱼性别分化的影响及机制研究 指导教师签字： 沥 学位论文完成日期： 沙f／．甲 、 y／’’ 答辩委员会成员签字：钐励1易． ∽ 一u～一““一 7修扒 q 7坂锄尻 l V 9 y矿 刀． |孤√ 臻促 刁彳砀灰 独创 独创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果， 也不包含未获得 ．(洼!垫逡直基丝噩噩挂剔直明的：奎拦亘窒2或其他教育机构的学位或证书使 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：荡凿 签字日期：纠／年岁月诸日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人 授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息 研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公 众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名： 尚莒 导师签字： 签字日期：沙ff年岁月朋 签字日期：弘|f年歹月朋 久效磷农药对斑马鱼性别分化的影响及机制研究 久效磷农药对斑马鱼性别分化的影响及机制研究 摘 要 久效磷农药是一种高效广谱的有机磷杀虫剂，能够诱导雄性金鱼卵黄原蛋白 基因的表达以及蛋白的合成与分泌，是一种潜在的环境雌激素。久效磷农药被证 实能够引发鱼类体内17,8-雌二醇(E2)水平显著上升，睾酮(T)水平显著下降，导致 雌雄激素水平失衡。由于鱼类的性别分化受性类固醇激素的调节，因此久效磷农 药可能会对鱼类的性别分化造成威胁。为了确定久效磷农药对鱼类性别分化的影 响及作用机制，本文选用斑马鱼作为实验动物，采用0．001、0．010和O．100mg／L 久效磷农药从斑马鱼受精卵时期暴露至其性别分化结束(040dph)，从性别比例 和性腺分化情况两个方面研究了久效磷农药对斑马鱼性别分化的干扰作用，并检 测了久效磷农药对斑马鱼性别分化时期(23--40dph)芳香化酶基N(Cyplgala和 Cypl9alb)pA及转录因子基因(Foxl2和DmrtI)表达的影响，从性别分化相关基因 表达的角度初步分析了久效磷农药干扰斑马鱼性别分化的作用机制，为今后深入 开展环境内分泌干扰物对鱼类性别分化影响的研究工作提供基础资料和科学依 据。 本文研究结果表明： (1)0．001、0．010和O．100mg／L久效磷农药暴露斑马鱼幼鱼至40dph，主要通 过雌激素效应干扰其性别分化过程，导致斑马鱼雌性比例随暴露浓度的增大逐渐 上升，其中0．100mg／L暴露组雌性比例达到71％，与对照组有显著差异；0．001 和0．100mg／L久效磷农药暴露导致斑马鱼出现异常的间性性腺——卵精巢。久效 磷农药能够致使幼鱼的性腺结构损伤，具体表现为卵巢中卵母细胞发生变形，卵 巢和精巢内部非细胞区比例增大甚至出现空腔结构等。 (2)0．001、0．010和0．100 mg／L久效磷农药暴露斑马鱼幼鱼至23dph、30dph 和40dph，采用实时定量PCR方法检测了性腺芳香化酶基因Cypl9ala和脑芳香 化酶基因Cypl9alb mRNA表达水平。结果表明：0．010和O．100mg／L久效磷农 药对斑马鱼Cypl9ala和Cypl9alb mRNA的表达有明显的促进作用，其中 0．100mg／L久效磷农药能够在斑马鱼性别分化整个时期显著促进Cypl9ala和 Cyplgalb mRNA的表达。本文推测久效磷农药通过上调性腺芳香化酶基因的表 达水平，能够直接促进血浆T向E2的转化，导致E2水平上升，T水平下降；同 时久效磷农药在上调脑芳香化酶基因的表达后，能够间接通过下丘脑．垂体．性腺 时久效磷农药在上调脑芳香化酶基因的表达后，能够间接通过下丘脑．垂体．性腺 轴进一步导致血浆雌雄激素比例失衡，从而引发雌性化效应，干扰斑马鱼的性别 分化。 (3)0．001、0．010和0．100 mg／L久效磷农药暴露斑马鱼幼鱼至23dph、30dph 和40dph，采用实时定量PCR方法检测了卵巢分化相关转录因子基因Foxl2和精 巢分化相关转录因子基因Dmrtl mRNA表达水平。结果表明：久效磷农药能够 促进斑马鱼性别分