旱稻耐盐基因的转化及耐盐性试验-作物遗传育种专业论文.docxVIP

摘要本研究采用基因工程的手段将戤菜碱醛脱氢酶(BADH)基因转入到已经具有1磺酸甘露醇 摘要 本研究采用基因工程的手段将戤菜碱醛脱氢酶(BADH)基因转入到已经具有1磺酸甘露醇 脱氢酶(mtlD)基因并稳定遗传的早稻297、早稻277、早稻502材料中，以期增加早稻的耐 盐性，解决盐碱地的开发利用问题，同时推动早稻的大面积推广。 以胚性愈伤组织为受体材料，利用农杆菌介导法将BADH基因导入旱稻材料。对外源基因 在早稻植株中的整合和表达情况进行了研究，同时在转化过程中，对影响转化的各个因素做了进 一步的探讨，从而进一步完善旱稻的遗传转化体系。 经过PCR检铡和Southem杂交证明，BADH基因也整合到早稻基因组中，再经PCR检 测，BADH基因和mtlD基因同时导入早稻材料中。获得同时转入BADH基因和mtlD基因的 植株共有44株，其中早稻502植株中有28株，早稻277植株中有9株．早稻297中有7株。 对转基因植株后代T】进行反转录PCR证明，BADH基因在早稻材料中得到表达． 转双基因植株To代生长情况总体看来，株高明显下降。 穗长明显变短，成穗率也下降，转 化植株生育期延长．64．2％的转化植株可育，但育性普遍下降，并且各株之间结实率差异较大。 将已经转入mt／D基因的并稳定遗传的T5代单基因材料和已经转入BADH基因T2代的 单基因材料在山东东营0．5％-0．6％NaCI的盐碱地上种植选择，大部分转基因植株正常生长，非 转基因对照植株(早稻502最严重)几乎不能生长。经过主要农艺性状的观察，以及PCR检测，以 及耐盐性检测，已选育出优良株系9个：T008，1∞6．T526，1566，T410，T461，1∞6，T122， T136。这些品系，稻米品质达到国家1-2级米标准，单株产量在7．895．12．899之间。 转基因植株耐盐性试验表明，转双基因植株的耐盐性得到明显的提高，能达到0．75％饭量， 体积)NaCa的耐盐能力：而在此盐浓度下，非转基因植株是不能生长的。 转单基因早稻植株与转双基因植株的在0．75％(质量／体积)Nact水培条件下，耐盐性比较 实验发现，无论是它们所表现出来的盐害症状的差异，还是转基因早稻的叶片相对电导率结果 以及地上部、地下部Na+／醛含量的测定结果都表明，转双基因植株比转单基因檀株表现出更 好的耐盐性。因此，推断出这两个耐盐基因起到了一定的协同(或累加)效应。这也证明了在 植物耐盐碱这种数量性状的改良上，进行多基因转化来改良的方法是可行的。 关键词：早稻，农杆菌，甜菜碱醛脱氢酶(BADH)，转化，耐盐 AbstractThrough黜engincermg Abstract Through黜engincermg approach，Betaine-aldehyde dehydrogenese(SAD奶gene has been transformed into upland rice that has carried mannitol—l-phosphate加ao)gene and inherited it steadily,which not only help to bmed Wansgenic upland rice varieties with salt toleranCe，but also be beneficial to exploit and utilize alkaline land and to enlarge the planting area of upland rice． The BAD／／gene was transferred into the upland rice by Agrohacterinm-mediated transformation， and in this transformation．the calli induced from mature and inlmature embryos was taken for experimental material．The integration and expression of exogenous gene in upland rice genome wcIc studied，and at the same time，after the factors influencing transformation had been discussed carefully，a highly efficient transformation system was established． The reSUlts of PCR and Southem blotting analysis showed that