通过打破盐桥拓宽酯酶的底物谱-国家级大学生创新创业训练计划平台.PDF

通过打破盐桥拓宽酯酶的底物谱 1 1 华中农业大学孟子桐 ，胡陈 1．华中农业大学食品科学技术学院，湖北省武汉市邮编 430070 1 （发表SCI 期刊：Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic ，2016 年 11 月 14 日） 指导教师：李牧 讲师 中文摘要：本作品以系统性挖掘、改造具有优良性能的新型酯酶为出发点，从红曲霉 M7 中挖掘出了一个具有 多方面优良性能（有机溶剂耐受性，金属离子耐受性，碱耐受性，高产量等）的低温酯酶 Lip10。但酯酶 Lip10 的 底物谱较窄，我们对 Lip10 进行结构改造来拓宽它的底物谱，使它能够应用于更广泛的领域中去，因此我们构建了 一系列突变体，最终发现 Y264F 突变体在不具有其他影响因素的条件下，可将束缚底物通道形状的盐桥打破。对野 生型（WT）酯酶 Lip10 和突变体 Y264F 进行表征发现 Y264F 突变体的底物特异性从短链底物改变为中长链底物， 而且对所以链长的底物都具有较高的水解活性，表明 Y264F 突变体是一个具有广底物谱的脂肪酶。同时，Y264F 突 变异体仍具有原始酯酶的全部优良性能。上述结果表明对酯酶 Lip10 的结构改造十分成功，也为酯酶底物偏好性的 改造提供了研究方法，也对酯酶底物特异性结构基础提出了新见解。 英文摘要 ：In this study, a cold-active esterasefrom Monascusruber M7, named Lip10, was isolated, cloned, purified, and characterized. Lip10 possessed many advantages, including high yield when heterologously expressed and good tolerance to both organic solvents and various metal ions. However, the substrate spectrum of esterase Lip10 is narrow.An Y264F variant in which the salt bridge between K243 and Y264 was disrupted was then constructedand characterized. Substrate specificity of the Y264F variant changed from shot-chain length substrate to medium- andlong-chain length substrates, indicating that the Y264F variant turned into a lipase. Meanwhile, the Y264F mutants still have all the excellent properties of the original esterase. The above results indicate that the modified Lip10 gets a wider range of potential uses in chemical synthesis and food processing industrial applications. 关键词 ：酯酶；脂肪酶；冷活性；有机溶剂耐受性；Lip10；Y264F；底物谱 一、前言 酯酶和脂肪酶都属于羧酸酯水解酶家族，催化脂肪酸酯的水解，并广泛应用于食品、制药和化 学工业中[1] 。在这些酶中，低温酯酶和脂肪酶近年来由于其在低温下的高活性而引起了极大的关注 [2][3]