杉木ISSR-PCR反应体系的正交优化.PDFVIP

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第31卷第3期 中南林业科技大学学报 VOL31No.3 ofCentralSouth of Mar.2011 2011年3月 Journal UniversityForestryTechnology 杉木ISSR-PCR反应体系的正交优化 安静,徐刚标,申晌保,谷振军,张玉梅,储秀云 (中南林业科技大学生命科学与技术学院,湖南长沙410004) 酶)进行优化,以建立杉木ISSR—PCR反应的最佳体系。结果发现杉木ISSR—PCR最佳反应体系(20 ttL)为: 1.8mmol/L,dNTPs0.2 90 MgCl2 mmol/L,引物0.7tanol/L,模板DNAng,TaqDNA聚合酶1U;退火温度为52~ 55℃。扩增反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性30S,52℃退火40S,72℃延伸2 min,40个循环;72℃延 伸7min;4℃保存。该反应体系的建立,为杉木种质资源分类、遗传多样性分析提供了更客观可靠的方法。 关键词:杉木;ISSR—PCR;正交优化 中图分类号:S791.27 文献标志码:A 文章编号:1673—923X(2011)03—0156—04 EstablishmentofISSR-PCRreactionfor lanceolata systemCunninghamia usingorthogonaldesign AN Yu-mei。CHU Jing,XUGang-biao,SHENXiang-bao,GUZhen-jun,ZHANGXiu-yun ofLife South (SchoolScienceandTechnology,Centralof and UniversityForestryTechnology, 410004,Hunfln,China) .j Changsha the factorsofthe PcR important Abstract:Throughorthogonaldesignexperiments,the inter-simplesequencerepeat as fit (ISSR-PCR)amplificationsystem,suchMgClz,dNTPs,DNA for template,primers,andTaqDNApolymerase lanceo/atawere resultsshowthatthesuitableISSR-PCRreaction thevol— Cunninghamiza

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