交通相关空气污染引起DNA甲基化及组蛋白H3K9乙酰化改变的表观遗传研究-劳动卫生与环境卫生学专业论文.docx

浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 致谢 致谢 时光如逝，转眼间我的研究生学习就要结束了。在这毕业论文即将付梓之时， 回首在浙大度过的岁月，点滴小事依然历历在目，不禁感慨万千。 首先，我要中心感谢我的导师金永堂教授给予的细心培养和谆谆教诲!从课 题的立题到实验的设计再到综述和论著的发表以及论文的撰写整个过程无不浸透 着金老师的心血。他广博的学识，严肃的科学态度，灵活的思维方式，耐心细致 的言传身教深深感染激励着我，定使我终身受益。感谢金老师对我的辛勤培育。 金老师不但在学习上给予我耐心细致的指导，在生活中也给了我莫大的关怀，这 份师恩我将终身难忘。 感谢杭州市路桥公司隧道管理处在本研究现场暴露过程中提供的大力支持。 感谢公共卫生学院叶怀庄副教授在样本收集、检测等过程中给予的指导和帮助。 感谢实验中心平台黄琼老师在实验分析过程中给予的帮助。感谢病理生理学曹慧、 王静宇、张晶同学在研究过程中给我的指导和帮助。 感谢包家立教授、杨延忠教授、李秀央副教授、章军副教授、叶怀庄副教授、 祝子逸医生及浙江大学医学院各位老师在开题报告、中期评估、及预答辩中给予 的建议与指导!感谢徐迎春老师给我的帮助和鼓励!感谢安徽医科大学公共卫生 学院各位老师对我的支持! 感谢徐沛维、刘听能、汪婷、张渊等同学在研究过程中的帮助。感谢刘昌明、 司文功等同学给我的支持。 最后特别感谢我的家人一直以来对我在各个方面的默默关心与支持，在此表 示衷心的感谢! 丁锐 2016年4月10日 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 交通相关空气污染引起DNA甲基化及组蛋白H3K9乙酰 化改变的表观遗传研究 浙江大学医学院 劳动卫生与环境卫生学 博士研究生 丁锐 博士生导师 金永堂教授 中文摘要 研究背景与目的 空气污染作为呼吸系统疾病的主要危险因素之一已经引起了广泛的关注。交 通污染是城市空气污染的主要来源，成分复杂。短时间暴露于交通污染即可引起 肺功能下降，而长期暴露与多种肺部疾病发生发展密切相关。尽管人们对此进行 了大量研究，但其具体机制目前仍不清楚。 交通空气污染属于混合污染，含有多种有害成分，包括颗粒物(PM)和有害 气体物质，可引起毒性效应。其中，表观遗传效应日益引起研究者的高度重视。 肺部疾病患者存在全基因组及特定基因甲基化改变、及组蛋白去乙酰化酶(HDAC) 的异常表达；而另一方面，交通空气污染中的各成分均可导致全基因组的低甲基 化改变、抑癌基因启动子甲基化水平升高、及乙酰基转移酶(HAT)活性的升高。 因此无论从肺部疾病的角度还是从空气污染物的角度，都说明表观遗传改变在交 通空气污染引起肺部疾病发生发展中发挥重要作用。 关于交通空气污染的表观遗传效应研究较少，而且大多对单一污染物所致的 表观遗传效应进行了研究，而并未考虑其作为混合污染物暴露时相互之间的交互 作用；另外，大多用周边空气污染监测结果来估计交通污染水平，且所用生物标 本多为血液，而对于交通空气污染的靶器官肺并未进行充分研究。本研究将大鼠 置于不同水平的交通污染现场，利用交通污染现场自然吸入的方式连续暴露不同 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 时间后，对大鼠血液及靶器官肺组织中DNA甲基化(LINE．1、Alu、p16、iNOS、 及么尸C基因)及组蛋H3K9G酰化水平进行定量分析，探索交通空气污染暴露引 起表观遗传改变的早期效应、累积效应、交互作用及剂量．反应关系。 材料与方法 选择城市交通繁忙的某交通遂道和交通十字路口为交通污染区，以大学校园 某区域为清洁对照区。分别在春季和秋季，将Wistar大鼠随机分成交通污染重暴露 组(交通遂道)、中暴露组(交通十字路口)、轻暴露组／对照组(校园)，采用交通污染 现场自然吸入的方式连续暴露4小时、7天、14天、及28天，同时按照我国大气质 量检测标准要求，对主要交通污染进行监测。收集不同暴露时间窗口大鼠血液及 靶器官肺组织，提取基因组DNA及总组蛋白。利用焦磷酸测序对全基因组甲基化 (LINE一1、Alu)及特定基因启动子甲基化(p16、iNOS、及么PC基因)进行定量 检测，用定量ELISA试剂盒对组蛋白H3K9乙酰化水平进行定量检测。 用SPSSl9．0软件进行统计分析。用独立样本f检验对春秋两季资料、及同组雌 雄两性大鼠资料进行比较。用单因素方差分析7)．．post．hoc(Bonferroni检验)对各组 间空气