健康人携带的沙门菌第一类整合子和沙门菌基因组岛的鉴定及特性分析-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

㈣㈣㈣删1111llllllllIllY1 ㈣㈣㈣删1111llllllllIll Y1 800 1 48 目 录 中文摘要 1 英文摘要 3 研究论文健康人携带的沙门菌第一类整合子和沙门菌基因组岛的鉴定 及特性分析 引言 6 第一部分健康人携带的沙门菌第一类整合子的鉴定及特性分析 前言HlJ舌 ．．77 材料与方法 ．．7 结果 ．14 附图 l 6 附表 ．20 讨论 ．2l 小结 ．22 参考文献 ．．23 第二部分健康人携带的沙门菌中沙门菌基因组岛的鉴定及特性分析 前言刖晶 ．28．28 材料与方法 ．．28 结果 ．33 附图 ．．35 附表 。38 讨论 ．39 ／J、结 ．4l 参考文献 4l 结论 ； 46 综述 质粒介导的耐药基因的获得及转移研究进展 47 致谢 ．57 个人简历 ．j ． ．．58 中文摘要健康人携带的沙门菌第一类整合子和沙门菌基因组岛的鉴定及 中文摘要 健康人携带的沙门菌第一类整合子和沙门菌基因组岛的鉴定及 特性分析 摘 要 目的：检测第一类整合子及沙门菌基因组岛(SGll)在健康人携带 的沙门菌中的分布及特性，分析其与细菌耐药性的关系。 方法：按照临床实验室标准化委员会(CLSI)的规定，用纸片扩散 法药敏试验检测58株健康人携带的沙门菌对15种抗生素的敏感性。58 株沙门菌中，1．45号为2005年分离株，46．58号为2007年分离株。聚合 酶链反应(PCR)检测I类整合酶基因(intll)，阳性者扩增耐药基因盒 和3’端，并对阳性扩增产物进行测序，所得序列应用Standard nucleotide nucleotic BLAST在NCBI(http：／／www．ncbi．nlm．nih．gov)上比对并进行序 列分析。滤膜法质粒接合转移试验对第一类整合子进行定位，并检测其可 移动性。Sau．PCR方法对菌株进行分子分型，所得条带用Quantity One软 件进行分析，绘制树状图。同时对第一类整合子阳性菌株检测沙门菌基因 组岛(SGll)，分别检测其左侧、右侧部分及其中间的部分基因，阳性扩 增产物进行测序及序列比对，对SGll染色体外环状形式及切除进行检测， 通过接合转移及自然转化试验检测其可移动性。 结果：158株沙门菌中有51株至少耐1种抗生素，占87．9％，其余对所 有抗生素均敏感。大多数耐1．2抗生素，也有多重耐药菌，如有2株鼠伤寒 沙门菌S1 3和S49分别耐9种和6种抗生素。耐药性最高的是链霉素 (82．8％)，其次为四环素(13．8％)。所有菌株对头孢噻吩、头孢曲松、 头孢西丁和阿米卡星均敏感。总的来说，07年的耐药率高于05年，如萘啶 酸的耐药率由2005年的2．2％上升至1J2007年的30．8％，耐药率增加了14倍。 2 5株(8．6％)沙门菌觑川阳性，分别为S13(鼠伤寒沙门菌)，$27(西汉普 顿沙门菌)，$28(纽兰沙门菌)，S49(鼠伤寒沙门菌)，和$56(德尔卑沙门 菌)。其中S56是从食品行业的工人中分离的。前三株沙门菌是05年分离株， 后两株为07年分离株。其中3株(S13，$49，S56)检出耐药基因盒，扩增 产物分别为2 000bp，l 000bp和1 200bp，1 000bp，2株($27和$28)无扩增 产物。测序结果显示l 000bp扩增子为aadA2基因，编码对壮观霉素和链霉 中文摘要素耐药，1 中文摘要 素耐药，1 200bp扩增子为blaPsE-l基因盒，编码对氨苄西林耐药，2 000bp 扩增子为dfrAl2-0，佴aadA2，编码对甲氧苄啶和链霉素耐药，携带的耐药 基因盒与耐药表型相符。3所检出的第一类整合子均位于质粒上且可通过 接合转移方式转移到其他菌株，滤膜法接合转移效率为1 O‘5到10_6。4分 子分型结果显示出良好的多态性，基于50％同源性可将全部菌株分为12 群，分别命名为A．L群，相同血清型的细菌也可有不同的基因型。5移)Rintll 阳性菌株分为4个群，S13和$49同属J群，其余3株$27，$28，$56分别属于B、 C、A群。第一类整合子阳性和阴性菌株无直接关系。两株多重耐药的鼠 伤寒沙门菌S13IS49均含第一类整合子，有loo％同源性。5$49带有 SGll，且位于历棚拜口伽口之间，SGll的多重耐药(MDR)区含有aadA2，肋R (编码对氯霉素和氟苯尼考的耐药)，纪fG(编码四环素耐药蛋白)，和 6肠PsE．1基因，另外也检出SGll上其他一些基因，如伽f(编码整合酶)，int-x (编码整合酶和切除酶)，S023(编码假定的解旋酶)，IS6100(插入序列 IS6100)，IS6100．S044(插入序列IS6100和S044)。6存在SGll染色体外环 状形式，