假基因PTENP1通过调控PTEN蛋白的表达影响胃癌进展的研究-普外科学专业论文.docxVIP

分类号：(R6) 分类号：(R6) 单位代码： 10312 密级： (公开) 学 号：南京医科六掌 硕士学位论文 题 目：篮基因里!墅坚L通过遇控里!丛蛋鱼鲍塞 达整煎置痤进展鲍丑窒 万方数据 f嘲愀掣南京医科大学 f嘲愀掣 南京医科大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作 所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他 个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和 集体，均已在文中以明确方式标明。本入完全意识到本声明的法律后果由本人 作者签名：凼l；乞 日期：加【碑6月厂日 导师签名：1翩獬：加琴醐％弹耶日p，易 日期：如U年易月了—日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和 借阅。本人授权南京医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数 据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本学位论文属于(请在以下相应方框内打‘‘、／’’)： 1、保密口，在一年解密后适用本授权书。 2、不保密Z 作者签名： 日期：≯【f年6月岁日 c 日期：如萨◇月卵 导师签名： ； 万方数据 南京医科大学硕士学位论文目录 南京医科大学硕士学位论文 目录 中文摘要 ．1 英文摘要 3 材料与方法 7 1．实验材料 一7 1．1实验仪器 7 1．2实验试剂 ．．8 1．3主要抗体 ．9 1．4主要试剂配制 ．9 2．实验方法 。1 1 2．1．1临床病理标本采集及细胞系来源 。11 2．1．2细胞复苏 11 2．1．3各组细胞系的传代 。12 2．1．4细胞冻存 。12 2．1．5细胞转染 ．．12 2．2组织及细胞总RNA提取(Trizol法) ．13 2．3逆转录反应和real time PCR检测 13 2．4细胞总蛋白的提取 15 万方数据 南京医科大学硕士学位论文2．5蛋白印迹分析方法(Western 南京医科大学硕士学位论文 2．5蛋白印迹分析方法(Western Blot) 15 2．6质粒的构建 ．16 2．7细胞增殖检测 一1 8 2．8细胞凋亡分析 ．19 2．9细胞迁移实验及侵袭实验 ．19 3．统计分析 ．．20 实验结果 ．．20 1．PTENPl在胃癌中表达下降，并且其表达下降部分与P咖1异常甲基化相关 1．1胃癌组织中PⅡ：NPl的表达水平 20 I．2胃癌组织中PTENPI的表达水平与胃癌病人临床病理资料之间的关系 20 1．3胃癌细胞系中PTENPl的表达水平 20 1．4胃癌中PTENPl的低表达部分与其启动子区域甲基化相关 21 2．PTENPl能影响胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力 ．．21 2．1转染pLJM-3’UTR后PTENPI 3’UTR的表达水平显著上调 ．．21 2．2 PTENPl在体外影响胃癌细胞的增殖 21 2．3 PTENPl在体外影响胃癌细胞的凋亡 ．22 2．4 PTENPl在体外抑制胃癌细胞的迁移和侵袭 22 3．PTENPl调节PTEN蛋白的表达 。22 万方数据 南京医科大学硕上学位论文参考文献 南京医科大学硕上学位论文 参考文献 ．32 文献综述 ．35 附录 49 发表文章情况 50 致{射 51 万方数据 南京医科大学硕士学位论文中文摘要 南京医科大学硕士学位论文 中文摘要 背景： 长链非编码RNA(10ng non—coding RNAs，lncRNAs)是一类转录本长度超过200nt 的RNA分子，它们缺乏蛋白编码的潜能。近年来，大量证据表明lncRNAs能以 RNA的形式在多种层面上(表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等)调控 基因的表达，从而在细胞增殖、细胞周期、分化和凋亡等多种生物学进程中发 挥重要的作用。假基因转录得到的RNA也属于IncRNA的一类，以前被认为没 有生物学功能，然而最近一些假基因被证实在肿瘤的发生中发挥着关键的作用。 PTENPl被发现在几种肿瘤细胞中发挥着抑癌作用，然而它在胃癌中的表达和 生物学功能仍不清楚。 目的： 研究胃癌组织和细胞系中PTENPl的表达水平及其与临床病理资料的关系，并 探索PTENPl在胃癌细胞中发挥的生物学功能及相关机制。 方法： 通过实时定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测68例胃癌组织及4个胃 癌细胞系中PTENPl的表达水平；通过去甲基化药物处理，研究PTENPl启动 子异常甲基化与其表达的关系：分别转染pLJM-3’UTR或pLJM空质粒进入胃癌 细胞系MGC．803及SGC．7901，通过CCK．8及平板克隆实验研究PTE