基于靶点PTP1B的胰岛β细胞保护的实验研究及抗代谢综合征药物筛选-药理学专业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 Chinese Chinese Academy ofMedical SciencePeking Union M—edical C—ollege DISSERTATION OF MASTER． 摘要 一3 1 前言 ．32 材料与方法 ．．32 结果 ．．35 l 抗代谢综合征药物筛选1—DIo小鼠 ．．35 1．1对葡萄糖耐量低减的作用 ．35 1．2改善胰岛素耐量作用 ．36 1．3对血总胆固醇的影响 ．37 2 抗代谢综合征药物筛选2一KKAy小鼠 37 2．1控制血糖的作用 ．38 2．2对葡萄糖耐量低减的作用 ．38 2．3改善胰岛素耐量作用 ．39 2．4对血脂水平的影响 ．4l 3 样品抗代谢综合征作用筛选结果小结 4l t寸{念 ．43 参考文献 ．．44 综j述 ．46 附录一：缩略词 ．．56 附录二：在读期间发表论文、参加会议、专利申请 ．．59 附录三：基金资助 一60 附录四：学位论文原创性声明和授权使用说明 一6l 致谢 ．62 万方数据 DISSERl肖rIoN DISSERl肖rIoN OF MASTER． Chinese Academy of Medical SciencePeking Union Medical College 基于靶点PTPlB的胰岛芦细胞保护的实验研究 及抗代谢综合征药物筛选 中文摘要 胰岛的异常可能是2型糖尿病(T2DM)发病的中心环节，特别是胰岛∥细 胞功能障碍被认为在T2DM发病进程中发挥主要作用。蛋白酪氨酸磷酸酶1B (PTPlB)是胰岛素信号通路和瘦素信号通路共同的负调控因子，被公认为胰岛素 增敏剂潜在的分子靶点。通过抑制PTPlB可以改善胰岛素抵抗，继而起到保护胰 岛∥细胞的作用。近期研究指出，PTPlB敲除的小鼠胰岛∥细胞量增加，葡萄糖 刺激的胰岛素分泌量增加。据此，本研究旨在探讨PTPlB是否为保护胰岛∥细胞 的潜在的分子靶点。 本研究采用尾静脉注射低剂量四氧嘧啶(alloxan)形成胰岛∥细胞受损小鼠 模型。以GSIS来评价动物胰岛∥细胞的分泌功能；以病理切片中胰腺的胰岛数 量和总面积评价胰岛细胞量：采用OGTT评价动物的糖代谢状态；用western blot 方法检测胰腺组织相关蛋白的表达。分别用体外酶活性、细胞内酶活性、以及动物 胰腺蛋白表达等方法评价样品对分子靶点PTPIB的作用。采用高脂饮食诱导的胰 岛素抵抗肥胖DIO小鼠和自发性2型糖尿病KKAy小鼠模型，以血糖水平、葡 萄糖耐量试验、胰岛素耐量试验、ISWBI指数血清胰岛素水平、血总胆固醇、血甘 油三酯等指标综合评价体外具有PTPlB抑制活性的合成化合物的抗代谢综合征作 用。 结果显示，化合物CX09040可明显改善胰岛口细胞受损模型小鼠的葡萄糖耐 量低减：抑制胰腺PTPlB的表达和活性，上调胰岛素受体(IR)磷酸化水平，调 控口细胞增殖相关因子Akt、Fox01的磷酸化水平、增加PDX．1表达，从而增加 胰岛细胞量及葡萄糖刺激的胰岛素分泌，发挥其保护胰岛∥细胞作用。提示分子 靶点PTPlB可能是保护胰岛声细胞的潜在作用靶点。 中药提取物RP2014006具有较强的体外抑制PTPlB作用。对胰岛夕细胞受 损模型小鼠，中药提取物RP2014006具有明显改善葡萄糖耐量低减作用，增加胰 岛细胞量、提高葡萄糖刺激的胰岛素分泌等胰岛夕细胞保护作用。抑制分子靶点 PTPlB，上调IR磷酸化水平，进而调控∥细胞增殖相关因子Akt、Fox01磷酸 化和PDX—l表达，可能是其发挥胰岛届细胞保护作用的重要机制。 体外对PTP 1B有抑制活性的13种合成化合物中，CXl400 l和CX09072可 明显改善机体葡萄糖耐量低减和胰岛素抵抗。 总之，本研究结果显示，PTPlB可能是保护胰岛声细胞的分子靶点。具有 万方数据 DISSERllArIoN DISSERllArIoN OF MASTER． Chinese Academy of Medical SciencePeking Union Medical College PTPlB抑制活性的化合物CX09040、CXl4001、CX09072和中药提取物 RP2014006，显示了一定的抗糖尿病新药的开发前景。 关键词：2型糖尿病；胰岛卢细胞；蛋白酪氨酸磷酸酶lB 2 万方数据 DISSERTATIoN DISSERTATIoN OF MASTER． ——一．． 兰皇!里!兰垒!!璺!竺兰竺!坚!璺堡兰!!!!竺!!垒!!望翌璺型里!竺旦坚!尘!兰!竺2111墨! Abstract Abnormalities of islet may play a key role in the onset of T2DM，pancreati