酶体外定向进化Ⅰ-华侨大学学报自然科学版.PDF

第 25 卷 　第 4 期 华 侨 大 学 学 报 ( 自 然 科 学 版 ) Vol . 25 　No . 4 　 　 　2004 年 10 月 Journal of Huaqiao University (Natural Science) Oct . 2004 　 ( ) 　文章编号 2004 酶 体 外 定 向 进 化( Ⅰ) 突变基因文库构建技术及其新进展 方柏山　　郑媛媛 (华侨大学材料科学与工程学院 ,福建 泉州 362021) 摘要 　介绍在酶体外定向进化研究中 ,几种常用基因文库构建技术及其应用方面的最新进展. 同时介绍近年 来 ,一些新开发的基因文库的构建技术及其应用情况. 对 目前几种主要方法的特色和缺陷进行讨论. 关键词 　酶 , 定向进化 , 基因文库 中图分类号 　Q 349 + . 5 ∶Q 785 ∶Q 55 文献标识码 　A 一个具有 N 个氨基酸残基的酶分子可能产生 20N 种重组 ,而自然界用了40 亿 a 的时间 ,实际发生 的重组也只是其中微乎其微的一部分. 在工业生产中 ,天然酶分子通常不能满足实际需要 ,所以需要人 ( ) 们对其进行改造或设计新的酶分子以满足工业需求. 酶的体外定向进化 简称定向进化 是近些年兴起 的改造酶分子的新策略. 它是根据达尔文进化论 ,在人为创造的进化条件下 ,在试管中模拟 自然进化机 ( ) 制 随机突变 、基因重组和自然选择 ,定向选择出所需性质酶分子的一系列操作. 它不需要事先了解酶 的空间结构和催化机制 〔1〕,适合于任何酶的改造. 其应用的领域也随着定向进化新技术的发展逐渐扩 大 ,现已涉及基因治疗 、疫苗 、食品、轻工业 、农业和环境治理等方面. 定向进化是以相当低的比率在编码 待进化酶的基因中随机引入突变 , 构建突 变库 ;利用人为创造的筛选压力 ,快速地排 除不利的突变体 ,从而选出所需性质的进 〔2 〕 化酶 . 也就是说 ,它是由两个相互独立的 关键技术组成. 一个是随机基因文库的构 ( 建 ,另一个是特定酶 特别是增加催化活 ) 〔3 〕 性 、增强选择性或稳定性 的筛选策略 . 〔4 〕 其情形大致如图 1 所示 . 本文首先介绍 定向进化的第一个关键技术 ———基因文库 构建技术及其新进展. 1 　基因文库构建及其新进展 图 1 　酶定向进化的策略 ( ) ( ) a 多样性基因文库的构建 ; b 用不 11 　 易错 PCR( ErrorProne PCR) 同的分析方法对文库进行高通量筛选 易错 PCR 可说是定向进化研究最早采用的一种构建基因文库的方法. 首次提出易错 PCR 是 Leung 〔5 〕 〔6 〕 等人 ,后经 Cadwell