甲戊肝炎病毒重组抗原的表达、纯化和免疫原性鉴定-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

论文独创性声明 论文独创性声明 本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果． 论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它结构 已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡 献均己在论文中作了明确的声明并表示了谢意。 作者签名： ～ 日期： 论文使用授权声明 本人完全了解中国协和医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅：学校可以 公布论文的全部或部分内容，可以采用影印，缩印或其它复制手段保存 论文，保密的论文在解密后遵守此规定。 作者签名：—— 导师：—— El期：—— 中国医学科学院北京协和医学院隈学生物学研究酝硕士研究生毕业论文 中国医学科学院北京协和医学院隈学生物学研究酝硕士研究生毕业论文 摘要 摘 要 甲肝病毒(Hepatitis Avirus，HAV)和戊肝病毒是肠道传播的肝炎病毒。两 种都是无包膜的正链小RNA病毒。HAV主要感染儿童，但随着年龄增加，一旦 感染，肝炎症状会更严重。戊肝暴发主要发生在许多发展中国家，导致数万人感 染。在孕妇患者中，戊肝致死率较高，可达20％。此外，HAV和HEV从流行病 学到临床症状都很相似，主要依靠实验室检查进行鉴别。已有文献报道因饮用了 被HAV和HEV污染的水而同时感染甲肝和戊肝的病例。 本论文主要研究了HAV vpl和HEV ORF2编码的抗原片断形成嵌合类病毒 颗粒的免疫原性。将HAV vpl(aa 24171)与HEV ORF2(aa 431-615)N端 相连，形成重组抗原AEA9342或与ORF2 C端相连，形成EAA9342重组抗原。 将上诉两种嵌合抗原基因插入表达载体pBV220，在大肠杆菌BL21中获得了高 效表达。但只有重组蛋白EAA9342能形成直径1020 am的VLP颗粒。 SDS—PAGE显示该抗原能形成部分二聚体结果，Western blot显示该二聚体能与 人抗HAV和HEV阳性血清反应。 本研究评价了重组蛋白AEA9342和EAA9342诱导的特异体液免疫反应。 两组昆明鼠，每组5只，分别注射一种重组抗原10嵋+弗氏佐剂，3周后再注射 一次，同时设一组空白对照组。于第一次免疫后2，4，6，8和10周采血测特异 性抗HAV和HEV IGg滴度。结果显示EAA9342诱导的抗体滴度在第8周达到 了l：80 000，显著高于AEA9342组。同时，EAA9342组的抗HAV抗体滴度达 到了1：7 000，也高于AEA9342组。 本研究的结果说明了嵌合VLP EAA9342可以诱导良好的抗HAV和HEV免 疫反应。此外，嵌入的HAV VPl片断可以增强VLP的免疫原性，同时VLP也 赋予了HAV vpl良好免疫原性。 关键词：甲肝病毒；戊肝病毒；基因克隆和表达；类病毒颗粒：免疫原性 中国医学秘学院＆北京协和医学院医学生物学研究所硕士磅究生毕业论文 中国医学秘学院＆北京协和医学院医学生物学研究所硕士磅究生毕业论文 摘要 Abstract Hepatitis A virus(HAV)and hepatitis E virus(HEV)are two known enterically transmitted viral hepatitis agents．Both of them are small，non—enveloped，positive strand RNA virus．HAV infection mainly affects children．However,severity of the disease increases with age．Numerous HEV outbreaks have occurred in many developing countries，resulting in tens of thousands ofpeople being infected．The high mortality rates，up to 20％，occur in infected pregnant women．In addition，hepatitis A and E share a lot of similar epidemiologic and clinical profiles，and cannot be discriminated from each other without laboratory tests．Co—infection of HAV and HEV or simultaneous outbreaks due to a