间尼索地平在细胞色素P450酶中的代谢及其代谢产物研究-药物分析学专业论文.docxVIP

目 目 录 中文摘要 l 英文摘要 4 研究论文 间尼索地平在细胞色素P450酶中的代谢及其代谢产物研究 引言 8 第一部分间尼索地平在人源CYP450酶各亚型中的代谢研究 前言刖吾 99 材料与方法 9 结果 l 1 附图 1 5 附表 20 讨论 22 小结 22 参考文献 23 第二部分HPLC．MS／MS法研究大鼠组织中间尼索地平及其代谢产物 前言刚舌 2525 材料与方法 25 结果 26 附图 29 讨论 35 小结 35 参考文献 35 第三部分 间尼索地平II相代谢葡萄糖醛酸化反应的初步探究 前言胃lj吾 3’737 材料与方法 37 结果 39 附图 40 讨论 41 小结 4l 参考文献 41 第四部分间尼索地平对映体在人肝微粒体中的酶促反应动力学研究 第四部分间尼索地平对映体在人肝微粒体中的酶促反应动力学研究 前言月0吾 4343 材料与方法 43 结果 46 附图 48 附表 5 1 讨论 52 小结 52 参考文献 52 结论 54 综述 高分辨质谱在药物代谢研究中的应用 55 致谢 65 个人简历 66 中文摘要间尼索地平在细胞色素P450酶中的代谢及其代谢产物研究 中文摘要 间尼索地平在细胞色素P450酶中的代谢及其代谢产物研究 摘 要 间尼索地平(m．nisoldipine)作为新型二氢吡啶类钙离子通道拮抗剂， 主要用于高血压和心脏病的防治。以往研究表明其多以代谢物形式排出体 外。肝脏作为药物代谢的重要器官，是多数I相和II相反应的发生场所， 细胞色素P450酶是参与药物代谢和生物活化的主要酶类，了解药物与 CYP450酶的作用关系能够为药物作用机制的研究及联合用药提供理论依 据。 本试验利用液质联用(mLC．MS／MS)技术，采用人肝微粒体温孵、 CYP450重组酶温孵及化学抑制剂试验，对参与间尼索地平生物转化的 CYP450酶亚型进行鉴别。对灌胃给药大鼠组织中的间尼索地平及其代谢 产物进行分析，为进一步理解其作用机制提供依据和技术支持。采用大鼠 肝微粒体体外温孵及大鼠体内代谢的方法，初步探究间尼索地平II相代谢 中的葡萄糖醛酸结合反应。对间尼索地平对映体在人肝微粒体中的酶促反 应动力学进行研究，优化反应条件，并比较两者的酶促反应动力学参数。 第一部分间尼索地平在人源CYP450酶各亚型中的代谢研究 目的：通过人肝微粒体温孵、CYP450重组酶温孵和化学抑制剂试验， 对参与间尼索地平生物转化的CYP450酶亚型进行鉴别。 方法：将温孵样品分别在EMS．IDA．EPI、MRM．IDA-EPI和 PREC．IDA．EPI模式下进行检测，分析反应生成的间尼索地平代谢产物。 人肝微粒体温孵试验，将间尼索地平与人肝微粒体进行体外温孵，应 用HPLC．MS／MS技术检测代谢产物，获得二级质谱碎片信息，推测代谢 产物结构。 化学抑制剂试验，CYP450特异性抑制剂与人肝微粒体温孵30 min 后加入间尼索地平，一定时间后测定体系中代谢产物生成量，并与未加入 抑制剂的阴性对照溶液比较。 CYP450重组酶温孵试验，将间尼索地平与CYP450重组酶进行体外 温孵，寻找代谢产物并比较各亚型酶中间尼索地平的代谢情况。 结果：在人肝微粒体温孵体系中共发现8种代谢产物，其中间尼索地 平氧化脱氢、3位侧链羟基化及两者结合的3种代谢产物生成量远高于其 中文摘要他5种代谢产物。 中文摘要 他5种代谢产物。 化学抑制剂试验中发现，盐酸噻氯匹定(CYP2C19抑制剂)能够明 显抑制3位侧链羟基化产物生成，而酮康唑(CYP3A4抑制剂)对氧化脱 氢产物的抑制作用明显。 CYP450重组酶试验中发现，CYP2C19和CYP3A4对间尼索地平的 催化活性明显高于其他4种亚型，CYP2C 1 9主要催化生成羟基化产物， CYP3A4对氧化反应的催化能力强。 结论：化学抑制剂试验及CYP450重组酶试验结果一致表明， CYP2C19和CYP3A4是人肝微粒体中参与间尼索地平生物转化的主要酶 亚型。 第二部分HPLC．MS／MS法研究大鼠组织中间尼索地平及其代谢产物 目的：通过对大鼠6种组织样品中间尼索地平代谢产物的分析，总结 药物代谢规律，为进一步阐明其作用机制提供依据。 方法：雄性SD大鼠灌胃给予间尼索地平1 h后，取心、肝、脾、肺、 肾和脑组织，加入生理盐水制成匀浆，经乙醚萃取后应用HPLC．MS／MS 对样品进行分析。结合本实验室前期研究中已经进行结构确证的代谢产 物，通过比较保留时间和二级质谱碎片信息推测所测得代谢产物的结构。 结果：在6种组织样品中均检测到间尼索地平的代谢产物，其中在肝 组织中发现9种代谢产物，且含量较高；在脾和肾组织中发现5种代谢产 物；在心和肺组织中发现4种代谢产物；在脑组织中仅检测到2种代谢产 物且含量