甲状腺激素对氚致神经元迁移障碍的改善作用放射医学专业论文.docxVIP

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 3 甲状腺激素对氚致神经元迁移障碍的改善作用 中文摘要 目的：本研究用氚水（HTO）和甲状腺激素（thyroxine TH)按相应实验条件处理 体 外 培养的 大鼠海马 神经细胞， 观 察 其 迁 移 距 离 的 改变 及迁移 相关因子 如 β-tubulin 微管蛋白、脑源性神经营养因子（BDNF）mRNA、Reelin mRNA 和整合 素α5β1 表达的变化，探讨甲状腺激素对氚辐射所致大鼠海马神经元迁移障碍的 改善作用。 方法：(1)神经细胞原代培养 取新生 1 d SD 大鼠，无菌条件下分离大鼠海马神经 元，培养基为 DMEM/F12 (含 10%胎牛血清、2%B27、20μg/mLbFGF 与 20μg/mLEGF)， 置于 37℃,5%CO2,饱和湿度的培养箱内培养； (2)阿糖胞苷处理 接种第 3 天加入终浓度为 5 μmol/L Ara-c 作用 24h, 抑制神经 胶质细胞的增殖，纯化神经元； (3)细胞分组 Ara-c 处理后，每 3 天更换培养液,按此方法培养的神经元经 NF160 免疫组化染色证实纯度达 90%以上。实验随机分为：①对照组，②HTO 组，③TH 组， ④HTO+TH 组，7 d 后，②和④组加入终浓度为 3.7×105 Bq/ml 的 HTO，③和④加入 终浓度为 0.3 ug/ml 的 TH，①加入等量的 PBS 做空白对照； (4)细胞迁移距离测定 用 Leica AF 6000 活细胞工作站分别观察不同实验条件下 神经元细胞迁移的情况，观察时间为 8 h，并用 LAS-AF-Lite 2.3.0 软件分析； (5)Western blot法检测神经细胞内微管蛋白和整合素α5β1的表达情况 以 ImageJ软件进行半定量分析,将测出各条带IOD值除以GAPDH 的IOD值,得到一相对 强度(relative intensity,RI),通过各处理组RI值的比较可得出蛋白表达的变化 规律。 (6)免疫细胞化学法观察神经细胞内微管蛋白和整合素α5β1的表达情况 (7)半定量 RT-PCR 法检测神经细胞内 BDNF 及 Reelin mRNA 的表达 PCR 产物在紫外 透射仪上检测，凝胶成像分析系统上扫描分析。同时以 GAPDH 作为内参对照。将 测出各条带 IOD 值除以 GAPDH 的 IOD 值,得到一 RI 值,通过各处理组 RI 值的比较 可得出 mRNA 表达的变化规律。 (8)统计学分析 数据表示为均数±标准差（?x±s），数据分析采用SPSS 13.0统计 软件，各组之间进行两独立样本间t检验，P ＜0.05为差异有统计学意义。 结果：(1)倒置显微镜下观察，培养7天神经元细胞胞体较饱满，立体感强，折光 性好、光晕明显，细胞与细胞之间突起联系紧密，胞体及突起表面平滑。 (2)迁移距离测定结果显示：与对照相比，受HTO照射神经细胞迁移距离明显缩短， TH处理过的两组神经细胞迁移距离均明显延长，且同为受照细胞，TH处理过的神 经细胞迁移得更远。单纯TH处理的神经细胞迁移距离也比受照细胞远（P0.01）。 (3) Western blot及免疫细胞化学结果显示：与对照相比，TH处理过的两组神经 细胞β-微管蛋白、整合素α5β1的RI值均明显增大，且同为受照细胞，TH处理过 的神经细胞β-微管蛋白、整合素α5β1的RI值显著增大，单纯TH处理的神经细胞 β-微管蛋白、整合素α5β1的RI值也比受照细胞大 （P＜0.01）。 (4)RT-PCR结果显示：与对照相比，受HTO照射的神经细胞BDNF mRNA、Reelin mRNA 的RI值明显减小，TH处理过的两组神经细胞BDNF mRNA 、Reelin mRNA的RI值均明 显增大，且同为受照细胞，TH处理过的神经细胞BDNF mRNA、Reelin mRNA的RI值 显著增大，单纯TH处理的神经细胞BDNF mRNA、Reelin mRNA的RI值也比受照细胞 大（P0.01）。 结论：氚水照射能下调 Reelin mRNA、BDNF mRNA、整合素α5β1 的表达，妨碍迁 移相关信号传导至细胞骨架，同时，受照细胞β-微管蛋白表达受抑损伤细胞骨架， 加之 BDNF 表达降低，阻碍神经元迁移。TH 能同时上调 reelin mRNA、BDNF mRNA、 整合素α5β1 与β-微管蛋白的表达，减轻氚照射所致损伤，进而改善其引起的神 经细胞迁移障碍。 关键词：甲状腺激素 氚辐射 Reelin 整合素α5β1 脑源性神经营养因子 β-微管 蛋白 Effects of Thyroxine on the Migration of Newborn rat Hippocampa