角膜缘上皮细胞培养和异体移植的实验研究-眼科学专业论文.docxVIP

安徽医科大学硕士学位论文角膜缘上皮细胞培养和异体移植的实验研究 安徽医科大学硕士学位论文 角膜缘上皮细胞培养和异体移植的实验研究 摘要 目的：检测以羊膜为载体的改良组织块培养法培养的角膜缘上皮细胞片的 细胞生物学特性，观察该细胞片移植到角膜缘干细胞严重损伤的异体兔眼角膜 上的效果。 ， (方法：切取含有完整上皮细胞的大小约2mm×2mm、厚约200pm异体兔角膜 缘组织，剪切成4个lmmX Imm小组织块，经消化酶处理后放在无上皮细胞的羊 膜上培养，用倒置显微镜观察细胞的生长情况，定期进行病理组织学、免疫组 化染色和电镜检查。环形切除26只成年白兔右眼角膜缘组织后刮除全部角膜上 皮细胞，建立角膜缘干细胞损伤模型。随机取24只白兔，将其分为实验组和对 照组，每组12只。细胞在羊膜上培养16天左右，实验组兔眼接受含有培养的 异体角膜缘上皮细胞的羊膜片移植，对照组单独进行羊膜移植，术后观察角膜 混浊度、角膜新生血管、角膜上皮修复等情况，定期进行病理组织学检查。 结果：角膜缘组织块在羊膜上培养第8天，培养的角膜缘上皮细胞出现汇 合，并很好地附着在下面的羊膜上；培养第16天，羊膜上培养的角膜缘上皮细 胞形成3—4层，羊膜上培养的细胞经广谱角蛋白(Pan．Keratin，PK)抗体和增 殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)单克隆抗体染色呈阳 性反应。角膜缘于细胞损伤模型制作后第6周，全角膜可见新生血管，角膜中 央上皮细胞剥脱伴结膜上皮入侵。移植术后第5天，实验组损伤角膜表面全部 上皮化，对照组则全部缺损；移植7骺第16天开始，实验组逐渐出现排斥反应， 、／ 对照组则没有出现排斥反应。∥7 ， 结论：以羊膜为底物改良组织块培养法培养的角膜缘上皮细胞片短期内可形成 多层，既保持角膜上皮细胞的特性，又具有高的增殖能力；该细胞片可以用来异体 移植治疗角膜缘功能缺陷的角膜病；但在异体移植术后早期角膜全部上皮化．晚期 j 安徽医科大学硕士学位论文黜黜斥触 安徽医科大学硕士学位论文 黜黜斥触 圆 关键词：角膜缘上皮细胞每养羊膜异体移植排斥反应。 安徽医科大学硕士学位论文The 安徽医科大学硕士学位论文 The Experimental Studies for Limbal Epithelial Cells Culture and Allogeneic Transplantation Abstract Objective To detect the effect of method which limbal epithelial cells were cultivated on amniotic membrane by tissue inoculation．To observe the effect of amniotic membrane containing cultivated limbal epithelial cells were transplanted to allogeneic limbal stem cell damaged rabbit cornea． Methods Small specimens(size，about 2．Ommx2．Omm；thickness，about 200um)of limbal epithelial cells were excised from the limbal regions in rabbits；each of them was cut into four tissues(1mm×1ram)．Making tissues loosen by enzyme digestion and cultivating them on acellular human amniotic membrane．The cultivated limbal epithelial cells on amniotic membrane were observed by inverted microscope every two or three days，and examined by histology,immunohistoehemical and electron microscop．26 rabbits underwent corneal epithelium curettement and limbal ablation to induce limbal stem cell deficiency and were randomly divided into two groups，experimental group and control group(n=1