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堙日
中文摘要姜黄素诱导人食管癌Ec.9706细胞凋亡
中文摘要
姜黄素诱导人食管癌Ec.9706细胞凋亡
及其机制的研究 摘 要
目的:食管癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,我国是食 管癌的高发国家,每年因食管癌死亡的人数占全部恶性肿瘤 死亡的近四分之一。目前治疗食管癌除早期手术,化学药物 已成为治疗恶性肿瘤的重要方法,但是绝大多数化学药物的 细胞毒作用缺乏特异性,在杀死肿瘤细胞的同时,无选择的 杀伤正常细胞。因此,寻找毒副作用小,抗瘤活性强的化疗 药物已成为国内外研究的热点。姜黄素是从姜黄属植物姜黄 的根茎中提取的一种植物多酚,可用于食品上色及佐味。近 年研究发现其药理作用广泛,如抗炎、抗氧化、抗凝、降血 脂、抗动脉硬化及抗肿瘤等作用。尤其姜黄素可诱导多种肿 瘤细胞凋亡,作为一种具有良好发展前景的抗癌药物,日益 引起人们的关注,但对人食管癌的作用及分子机制研究较 少,本研究通过体外培养人食管癌Ec.9706细胞,研究姜黄 素作用后细胞形态、细胞凋亡及其调控基因表达的影响,探 讨姜黄素在食管癌细胞中的作用机制,为食管癌的化学防治 提供实验依据。
肿瘤发生不仅是瘤细胞的过度增生,还存在死亡过少, 凋亡机制障碍,细胞凋亡参与肿瘤起始过程,并对肿瘤发生 发展起负调控作用。本研究运用多种实验技术,对细胞凋亡 中凋亡抑制蛋白因子(Livin),促凋亡因子(Smac)矛1]Caspase.3
中文摘要进行检测和分析,以期进一步阐明细胞凋亡调控基因在肿瘤
中文摘要
进行检测和分析,以期进一步阐明细胞凋亡调控基因在肿瘤 发生发展中的作用。
方法:将Ec.9706细胞于37℃,饱和湿度5%C02的常 规条件下培养,待细胞进入对数生长期后用于实验。
l应用光镜观察细胞形态学变化:将不同浓度的姜黄素 作用于Ec.9706细胞,在倒置相差显微镜下定时观察细胞的 生长情况并照相。
2采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测药物对细胞的生长 抑制作用。
3流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡、细胞周期分布:收集 经不同浓度姜黄素作用12h、24h、48h的Ec.9706细胞及对 照组细胞,冷PBS漂洗。预冷70%乙醇4C,固定,上机检 测前离心去固定液,O.5%胃蛋白酶消化,碘化丙锭(Propidium
Iodide,PI:50mg/L Trinton X-100 1.O%)室温避光染色。流式 细胞仪上机检测,应用软件进行分析。
4 FCM检测caspase.3蛋白的表达:收集经不同浓度姜黄 素作用12h、24h、48h的Ec.9706细胞及对照组细胞,按常 规方法进行荧光标记,流式细胞仪检测荧光强度,以荧光指
数(FI)表示蛋白的表达情况。 5应用免疫细胞化学方法观察细胞凋亡调控因子Srnac、
Caspase3蛋白表达的变化。
6 western blot半定量检测基因蛋白Livin、Smac、Caspase3 表达,并分析各蛋白表达之间的相关性及其在姜黄素抗食管 癌中的作用机制。
结果:
中文摘要姜黄素对Ec.9706细胞凋亡及其调控基因的影响
中文摘要
姜黄素对Ec.9706细胞凋亡及其调控基因的影响 1经40、80、120、160}tmol/ml姜黄素处理Ec.9706细
胞12h、24h和48h后,倒置相差显微镜下观察,与对照组相
比,用药组的细胞生长明显被抑制,胞浆内颗粒增多增粗, 核浆比例降低,部分细胞变圆而悬浮在培养基内。提示 Ec.9706细胞趋于凋亡。
2分别用姜黄素(O、40、80、120、160Iamol/m1)作用于 Ec.9706细胞12、24、48h,MTT结果显示姜黄素能明显抑 制Ec.9706细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖性。作用12h、 24h和48h后,Ec.9706细胞半数抑制率(inhibitory concentration giving 5 0%inhibition, IC50)分别为 2 16.1447p
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