拮抗细菌对姜瘟病的生物防治研究-植物病理专业论文.docxVIP

论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成 论文独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或 集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四』II农业大学或其它教育机构的学 位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中 作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名： 当-1；五 h时年 6月巧同 关于论文使用授权的声明 本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式 在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 研究生签名： 乏、1 洌一年舌月≥3同 导师签名 纺锨 狮玎年多月哆日 摘要本研究在四川地区的生态条件下，以防治姜瘟病为目的，从姜栽培区未发病及发 摘要 本研究在四川地区的生态条件下，以防治姜瘟病为目的，从姜栽培区未发病及发 病较轻的姜块茎围土壤中分离并筛选出大量对姜瘟病原菌有拮抗作用的细菌菌株。通 过平板扩散法培养检测，筛选出对姜瘟病菌具有强拮抗作用的菌株，同时研究菌株的 分类地位、发酵条件、土壤中的定殖情况、促生性以及田间防效试验，为姜瘟病的生 物防治提供依据，主要研究结果如下： 2003年6月在雅安飞仙关多功乡13个未发病或发病较轻的生姜田块中分离到 217个细菌菌株，通过平板抑菌试验初筛，其中对姜瘟菌有抑制作用的菌株有32株， 占菌株总分离数的14．7％，抑菌圈直径lcm以上的有19个，占拮抗菌总数的59．4％。 其中三个(L】、D4、TIo)菌株对姜瘟病有强抑菌作用，抑菌圈直径都在2．2em以上。 Ll、D4、Tlo菌株除对姜瘟病菌有抑制作用外，也对葡萄孢菌(Botrytis cinerea Pers．)，油菜菌核菌(Sclerotinia sclerotiorum)及小麦赤霉菌(G而6e陀ff口zeae)等多 种病原真菌有抑制作用，可见，它们具有一定的广谱抗真菌作用。 对Ll、D4、Tlo菌株进行形态特征和生理生化鉴定，确定Ll为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、D4和Tl为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。 LI、D4、Tlo菌株在姜块茎围的定殖试验表明：Ll的最终定殖密度在非灭菌土中 为1．03×104cfu／g，在灭菌土中为3．88×104cfu／g，比D4和T10分别在非灭菌土和灭菌土 中的最终定殖密度都高。它们对生姜的生长均有一定的促进作用，其中L．菌株的促生 性最为明显。 用不同浓度的菌悬液处理田间自然发病的生姜田块，结果表明：生防菌对姜瘟病 均具有防治作用，且在较高浓度下防治效果更好，LI菌株在浓度为2×10Scfu／ml时，防 效达到60．1％。 选用田间防效较好的Ll菌株用比浊法和活菌数法测定它的生长曲线，测定结果基 本符合细菌生长规律，且两种方法测出的细菌对数生长期的数据基本～致。 研究不同条件下Ll菌株的生长情况及抑菌活性的大小，单因子试验表明：L．菌株 的最佳培养基是NYBD培养基，最佳碳源是葡萄糖，最佳氮源是牛肉浸膏和酵母浸膏： 在PH为7，装液量为25ml，温度为30C的条件下可获得最佳的生长状态与最大的抑菌 活性。 葡萄糖、牛肉浸膏、酵母浸膏、NaCl浓度四因素的正交试验表明：Ll菌株获得最 大抑菌活性的培养基配方为葡萄糖259，牛肉浸膏log，酵母浸膏59,NaCl 1．2％。其影响 因素作用大小依次为：酵母浸膏葡萄糖牛肉浸膏Nacl。LI菌株获得最大生长量的培 养基配方为葡萄糖209，牛肉浸膏109，酵母浸膏39，NaCI I．5％。其影响因素作用大小依 次为：葡萄糖酵母浸膏NaCI牛肉浸膏。 用(NH4)2s04沉淀法提取蛋白及多肽类抑菌物质，最佳(NI-h)2S04饱和度为 60％a DEAE纤维素离子交换层析、SephadexG．100凝胶层析等方法，对其进行分离纯 化，得到一个拮抗活性峰，活性峰经过SDS．PAGE电泳显示为单一蛋白带，分子量约为36KD。 化，得到一个拮抗活性峰，活性峰经过SDS．PAGE电泳显示为单一蛋白带，分子量约 为36KD。 对粗提蛋白进行稳定性分析，该抑菌活性物质为较耐高温的水溶性蛋白类物质， 在pH值5～8范围内较稳定，光稳定。粗提蛋白的最低抑菌浓度为蛋白粗提液与磷酸缓 冲液按1：4的比例混合时为最低抑菌浓度。 关键词：拮抗细菌 姜瘟病 生物防治 抑菌圈 Study Study on Biocontrol o