姜黄素衍生物对肝纤维化小鼠核因子-κB表达的影响-内科学（传染病学）专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 温州医科大学硕士学位论文 Tris WB Tris(hydroxymethyl)aminomethane western-blot 三经甲基氨基甲炕 蛋白免疫印迹 a -SMA α-smooth muscle actin α-平滑肌肌动蛋白 2 温州医科大学硕士学位论文姜黄素衍生物对肝纤维化小鼠核因子一K 温州医科大学硕士学位论文 姜黄素衍生物对肝纤维化小鼠核因子一K B表达的影响 中文摘要 背景和目的： 肝纤维化(Hepatic fibrosis)是指肝细胞坏死或者变性时，肝脏内的纤维结 缔组织异常的增生而分解减少的过程n’21。肝纤维化是发展成肝硬化的一个必经 的中间环节，可进展为肝硬化甚至肝癌，严重危害人类的健康。肝纤维化在各种 因素的损伤下，正常结构受到破坏，肝细胞变性坏死，肝小叶和血管等被改建。 目前己证实了肝纤维化可以逆转口1。病毒性肝炎或酒精性肝炎等原因都可导致肝 脏纤维化。要是这些病因持续存在，纤维化会逐步加重，可出现纤维条索之间相 互连接，形成完整的间隔，假小叶形成并慢慢形成肝硬化。因此，对肝纤维化机 制的研究，成了研究领域的热门。 姜黄素(Curcumin)具有抗炎n3、抗糖尿病陆3、降胆固酣副、抗氧化n1及抗肿 瘤删等作用，来自中药姜黄素根茎。大量的动物实验表明姜黄素对许多疾病都具 有一定的抗炎作用，姜黄素可以通过产生炎症因子达到降低炎症反应的目的，包 括支气管炎、动脉粥样硬化、帕金森吼101、癫痫n1’121、炎性肠病n 3I、自身免疫性 疾病，糖尿病肾病Ⅱ钔等。 C66是姜黄素新型的类似物，通过研究证明其具有和姜黄素相同的作用，且 生物利用度有大幅度的提高n引。目前已有实验发现姜黄素衍生物C66能保护糖尿 病小鼠肾脏，能明显减轻糖尿病小鼠的肾功能损伤以及缓减肾脏病理结构的改 变。该实验采用腹腔注射四氯化碳(CCL。)致小鼠肝纤维化模型，予以C66治疗， 并观察C66的抗肝纤维化效果及其可能的相关机制。 方法： 健康的雄性C57BL／6J小鼠33只。随机选取9只小鼠作为正常对照组，给予 普通饲料和自来水，余下24只小鼠于腹腔注射40％CCL。混合液，首次为4 ml／kg， 此后为2 ml／kg，每周2次，连续6周。于造模6周末随机选取6只小鼠，取肝 右叶以4％多聚甲醛固定，制成肝组织石蜡切片并行病理学检测，判断造模是否 成功。模型建成后，随机将造模小鼠均分成模型对照组(9只)和C66治疗组(9 只)。第6周开始，模型对照组和C66治疗组继续造模，同时给予治疗组C66 10 mg／kg／d灌胃，其余组均给予等量的0．5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液，连续 万方数据 万方数据 温州医科大学硕士学位论文 温州医科大学硕士学位论文 6周。第12周末，各组小鼠以水合氯醛麻醉，摘眼球取血，检测血清丙氨酸氨 基转移酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平。取适量肝左叶组织，用于测定 羟脯氨酸(Hyp)含量。取适量肝右叶，石蜡包埋，行脏染色及Masson染色， 观察其组织学变化，并进行肝纤维化半定量评分；另取余下肝组织于一80℃冰箱 冻存。采用RT—PCR检测胶原I(Collagen I)、Q一平滑肌肌动蛋白(Q—SMA) mRNA表达情况。Western免疫印迹法检测各组Collagen I、Q—SMA及核因子一 B p65(NF—K B p65)、核因子一K B抑制蛋白Q(I B Q)的蛋白表达情况。 采用单因素方差分析比较样本均数。 结果： 1．观察小鼠一般情况：正常对照组小鼠生长良好，体型丰满，毛发顺滑，进 食好且活跃；模型对照组小鼠发育和周龄不相符，消瘦，毛发稀疏，进食差，反 应迟钝；C66治疗组状态较正常对照组稍差，和模型对照组相比有明显的改善， 形体较丰满，毛发尚光泽，进食较好，反应尚可。在这期间，正常对照组均存活， 模型对照组小鼠死亡2只，C66治疗组小鼠死亡1只。 2．肝脏大体形态：正常对照组肝脏软而细腻，边缘光整，无异常改变；模型 对照组小鼠剖腹后部分可观察到少量腹水，肝脏肉眼观察部分表面有小结节，肝 脏体积明显缩小，质地变硬，边缘变钝，与周围器官粘连广泛；C66治疗组剖开 腹腔后未能观察到腹水，肝脏肉眼观察体积缩小，边缘变钝，质地变硬，表明未 见明显结节，与周围器官无明显粘连。 3．肝脏病理学改变：正常对照组小鼠胍染色在光镜下可见肝结构完整，肝 细胞无变性、坏死：模型对照组小鼠肝组织结构被破坏，可见炎性细胞大量浸润， 纤维组织增生形成典型的假小叶；C66治疗组的肝细胞变性坏死程度和模型对照 组相比有明显的减轻，纤维沉积减少明显，未见明显的假小叶形成。 正常对照组小鼠Masson染色在光镜下可见肝结构完整，未见明显的纤维组 织增生；模型对照组