胶联羊膜缓释药膜的实验研究-眼科学专业论文.docxVIP

重庆医科大学硕士研究生学位论文胶联羊膜缓释药膜的实验研究 重庆医科大学硕士研究生学位论文 胶联羊膜缓释药膜的实验研究 摘 要 目 的 研制一种以胶联羊膜为载体的药物缓释材料一胶联羊膜缓释药 膜，初步研究其缓释性能和治疗效果，探讨该材料用于眼表移植及组 织修复的可行性和优越性，为其临床应用提供实验依据。 本研究分为三部分： 实验一：bFGF胶联羊膜缓释药膜的体外缓释作用 实验二：bFGF胶联羊膜缓释药膜治疗角膜碱烧伤的实验研究 实验三：更昔洛韦胶联羊膜缓释药膜的缓释性能 方法 实验一：将bFGF与纤维蛋白胶(FG)混合后再与羊膜(AM)胶联， 制成浓度lng／ml(1ng／em3)I拘bFGF胶联羊膜缓释药膜(bFAM)，将此药 膜放入透明试管中，每日留取浸出液，采用ELISA方法测定其中bFGF 的含量，研究bFAM的体外缓释作用。 实验二：将bFGF与纤维蛋白胶混合后再与羊膜胶联，制成浓度为 2．51ag／ml(2．5pg／cm3)I拘bFGF胶联羊膜缓释药膜。新西兰大白兔45只， 浸有lmol／LNaOH的圆形滤纸片贴于兔角膜表面，建立新西兰大白兔 角膜碱烧伤模型，随机分为3组：A组：bFGF胶联羊膜缓释药膜移植 组，B组：羊膜移植组，C组：烧伤未治疗组，每组15只。4~6小时内 重庆市科委科学基金资助课题(渝科委计：2003--23) 重庆医科大学硕士研究生学位论文按分组行bFAM／AM移植术。术后观察羊膜溶解脱落、角膜水肿混浊、 重庆医科大学硕士研究生学位论文 按分组行bFAM／AM移植术。术后观察羊膜溶解脱落、角膜水肿混浊、 角膜上皮愈合等情况，并对新生血管、角膜透明度、荧光素染色情况 进行评分。术后第7、14、28d，每组处死5只动物，取标本作组织病理 学检查，免疫组织化学方法半定量检测角膜中bFGF的表达。 实验三：体外实验：将纤维蛋白胶与更昔洛韦(GCV)混合后与羊 膜胶联，制成浓度为5mg／ml(5mg／cm3)的更昔洛韦胶联羊膜缓释药膜 (GFAM)，将此药膜放入透明试管中，每日留取浸出液，采用高效液 相色谱法(I-IPLC)测定其中GCV的含量，研究GFAM的体外缓释作用。 在体实验：设立实验组与对照组；实验组在兔眼表作GFAM移植后， 1d、2d、3d、4d、5d分别抽取房水，检测其中GCV的质量浓度：对 照组滴lmg／mlGCV眼液100ul，每2h一次，于第5次滴眼后1．5h抽 取房水，HPLC法测试房水中GCV的质量浓度。 结 果 实验一：体外释放实验显示，24 h后bFGF的累计释放率为 (41．85+4．45)％，48 h后为(61．5-4-4．49)％，以后释放逐渐减慢，96 h累 计释放率达(83．3+6．54)％，此后释放趋于平衡。 实验二： 1．羊膜溶解脱落情况：术后第5d，B组单层羊膜溶解，部分动物 角膜表面羊膜完全脱落，而A组bFGF胶联药膜尚无明显变化。至术后 1 4d时，A组bFGF胶联药膜大部分溶解脱落。 2．角膜混浊度评分：术后28d时，A组与B组以及B组与C组间比较 差异在统计学上均有显著意义(PO．05)，A组角膜混浊度最轻。其余时 3 重庆医科大学硕士研究生学位论文间点各组间差异在统计学上无显著意义(PO．05)。 重庆医科大学硕士研究生学位论文 间点各组间差异在统计学上无显著意义(PO．05)。 3．角膜新生血管评分：术后第14d时，A、B两组角膜新生血管评 分与C组差异在统计学上无显著意义(PO．05)；28d时，A组角膜新生血 管面积小于C组(PO．0 1)，B组亦小于C组(PO．05)。 4．角膜上皮愈合面积评分：术后第14、28d时，A组及B组角膜上 皮愈合面积均多于C组，在统计学上差异具有显著性(PO．0 1)，且2个 时间点A组及B组角膜上皮愈合面积在统计学上差异具有显著性 (PO．05)。 5．角膜中bFGF的表达：术后7d时，A组bFGF表达水平高于B组及 C组，在统计学上差异具有显著性(PO．05)，其阳性表达主要位于角膜 上皮细胞及浅基质层。其余时间点3组间bFGF表达在统计学上差异无 显著性(PO．05)。 实验三： 1．体外释放实验显示，24 h后GCV的累计释放率(45．67+5．32)％， 48 h后为(63．42士4．68彬，以后释放逐渐减慢，96h累计释放率达 (76．57+5．49)％，此后释放趋于平衡。 2．动物实验表明：对照组房水中GCV浓度为(O．501+0．040)rtg／ml。 实验组房水中GCV浓度随时间逐渐降低。第ld，实验组房水GCV浓度 为(O．613+0．037)gg／ml，实验组房水药物浓度高于对照组，差异在统计 学上具有显著意义(P0．01)。第2d，实验组房水GCV浓度为 (O．554+