胶质瘤干细胞样细胞中MGMT表达以及与替莫唑胺耐药相关机制分析-药剂学专业论文.docxVIP

广东药学院硕士学位论文胶质瘤干细胞样细胞中 广东药学院硕士学位论文 胶质瘤干细胞样细胞中 MGMT 表达以及与替莫唑胺耐药相关机制研究 IV IV 第四章 胶质瘤干细胞样细胞中 NF-κB 对 MGMT 的调控 目的：研究 NF-κB 与 MGMT 表达之间的关系；探讨通过靶向 NF-κB 通路来 调控 MGMT 的表达，从而逆转 MGMT 阳性表达胶质瘤干细胞样细胞对 TMZ 耐 药的分子机制。 方法：(1) 应用 CCK-8 法检测 MG-132(蛋白酶体抑制剂，可抑制 NF-κB 激活) 与 TMZ 对 MGMT 阳性表达的胶质瘤干细胞样细胞(U251G、U373G、SKMG-4G、 SF295G 和 SKMG-1G)及其相对应纯化前胶质瘤细胞株(U251、U373、SKMG-4、 SF295 和 SKMG-1)的联合杀伤作用。(2) RT-PCR 检测不同用药组（空白对照组、 TMZ 组、MG-132 组和 TMZ+MG-132 组）MGMT 阳性表达的胶质瘤干细胞样细 胞(U251G、U373G、SKMG-4G、SF295G 和 SKMG-1G)及其纯化前相对应胶质 瘤细胞株(U251、U373、SKMG-4、SF295 和 SKMG-1)中 MGMT 和 NF-κB 基因 的表达状况；(3) western blot 检测不同用药组（空白对照组、TMZ 组、MG-132 组和 TMZ+MG-132 组）MGMT 阳性表达的胶质瘤干细胞样细胞(U251G、U373G、 SKMG-4G、SF295G 和 SKMG-1G)及其相对应胶质瘤细胞株(U251、U373、 SKMG-4、SF295 和 SKMG-1)中 MGMT 和 NF-κB 蛋白的表达状况。所得数据 结果处理采用 SPSS 16.0 统计分析软件分析，用 x ± s 表示，P0.05 为有显著性统 计学意义。RT-PCR 与 western blot 数据用 QauntityOne 软件和 CORELDRAWX4 软件对数据进行分析。 结果：(1) CCK-8 法检测得经 MG-132 与 TMZ 联合作用后，对 MGMT 表达的胶 质瘤干细胞样细胞 U251G、U373G、SKMG-4G、SF295G 和 SKMG-1G 有增强 杀伤作用，而相对应的胶质瘤细胞株 U251、U373、SKMG-4、SF295 和 SKMG-1 经 MG-132 与 TMZ 联合作用后未见协同杀伤效果。各组药物对各个胶质瘤干细 胞样细胞杀伤率（%）为： PAGE PAGE VI 杀伤率（%） 细胞 分组 control TMZ MG-132 T+M 药物作 用 U251 0 U251G 0 SKMG-4 0 SKMG-4G 0 U373 0 U373G 0 SKMG-1 0 SKMG-1G 0 SF295 0 SF295G 0 48.04 ±1.00 17.48 ±2.24 45.06 ±2.45 20.44 ±2.95 46.91 ±6.23 20.94 ±2.93 42.39 ±1.60 19.33 ±4.07 43.72 ±2.62 19.18 ±0.68 15.49± 2.12 19.18± 4.27 16.52± 4.73 20.69± 3.84 16.76± 3.90 15.25± 1.96 15.41± 1.63 16.69± 1.79 16.30± 4.49 19.08± 3.18 60.65± 2.49 62.99± 协同 1.07 57.28± 8.35 60.87± 协同 4.87 64.57± 2.75 62.37± 协同 1.53 54.12± 2.07 57.02± 协同 1.53 55.43± 4.35 57.37± 协同 3.20 (2) RT-PCR 结果显示胶质瘤干细胞样细胞（U251G, U373G, SKMG-4G, SF295G 和 SKMG-1G）在空白对照组中 NF-κB 与 MGMT 基因均为阳性表达； TMZ 处理后 NF-κB 基因无明显下调，而 MGMT 基因表达下调；MG-132 处理 后 NF-κB 基因明显下调，MGMT 基因表达也有所下调；MG-132 与 TMZ 联用 后 NF-κB 基因也明显下调；MGMT 基因也有所下调。(3) western blot 结果显示 胶质瘤干细胞样细胞（U251G, U373G, SKMG-4G, SF295G 和 SKMG-1G）在空白 对照组中 NF-κB 与 MGMT 蛋白均为阳性表达；TMZ 处理后 NF-κB 蛋白无明 显下调，而 MGMT 蛋白表达下调；MG-132 处理后 NF-κB 蛋白明显下调，MGMT 蛋白表达也有所下调；MG-