胶质瘤干细胞诱导宿主肝组织内肿瘤间质细胞恶性转化的实验分析-神经外科学专业论文.docxVIP

I I 胶质瘤干细胞诱导宿主肝组织内肿瘤间质细胞恶性转化的实验研究 中文摘要 胶质瘤干细胞诱导宿主肝组织内肿瘤间质细胞恶性转化 的实验研究 中文摘要 第一部分：双色荧光示踪人胶质瘤干细胞肝脏异位移植模型的建立 及生物学特征分析 目的：通过建立红、绿双色荧光示踪胶质瘤干细胞异位肝脏移植模型，为进一步 研究异位移植瘤的肿瘤微环境奠定基础。 方法：将携带红色荧光蛋白（RFP）基因的慢病毒转染人胶质瘤干细胞 SU3，获 得稳定高表达 RFP 的 SU3-RFP 细胞株，接种于表达绿色荧光蛋白（GFP）的转基因 裸小鼠肝脏内，致瘤后取部分荷瘤鼠载瘤肝脏，于荧光成像系统观察；其它荷瘤鼠用 4%多聚甲醛心脏灌注后，取载瘤肝脏固定脱水，OCT 包埋后做连续冰冻切片，HE 及 DAPI 染色后，在普通光镜、荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜下观察移植瘤组 织病理特征。 结果：转染 RFP 基因后所得 SU3-RFP 细胞仍保持其干细胞特性。SU3-RFP 的肝 脏移植成功率为 15/18（约 83％）。腹腔解剖病理及活体荧光成像显示 SU3-RFP 易 向肝内及肝外脏器侵袭；在移植瘤冰冻切片中，表达 RFP 的肿瘤细胞和表达 GFP 的 宿主细胞相互交织存在，共同参与组成肿瘤微环境；双色荧光示踪清晰显示了肿瘤细 胞侵袭宿主血管、远处转移及其与宿主细胞的融合或吞噬。 结论：该模型的建立为深入研究异位移植胶质瘤微环境奠定了基础；同时双色荧 光示踪在异位移植瘤肿瘤组织重构中的应用对研究肿瘤细胞侵袭、转移及其与宿主细 胞相互作用等方面具有很高的实用价值。 关键词：胶质瘤干细胞；双色荧光示踪；移植瘤模型；肿瘤微环境；转基因荧光 裸小鼠 II II 中文摘要 胶质瘤干细胞诱导宿主肝组织内肿瘤间质细胞恶性转化的实验研究 第二部分：胶质瘤干细胞可诱导宿主肝组织内胶质瘤间质细胞恶性 转化 目的：在已报道的脑内原位移植的胶质瘤干细胞可诱导宿主胶质细胞发生恶性转 化的基础上，进一步探索此类恶变的发生是否与肿瘤移植部位特异性微环境相关。 方法：将转有红色荧光蛋白（RFP）基因的人胶质瘤干/祖细胞 SU3-RFP 接种于 全身表达绿色荧光蛋白（GFP）的裸小鼠肝脏，致瘤后取移植瘤组织做常规病理检测 和细胞培养，从中单克隆具永生化的 GFP+细胞和 GFP+/RFP+双阳性细胞传代，做细 胞表型分析和致瘤试验。 结果：取肝内异位生长的移植瘤组织再培养获得永生化的宿主鼠源间质细胞，并 建立了 B4、B9、B10 三株高增殖性单克隆细胞株，其中 B4 为共表达 GFP/RFP 的融 合细胞，还同时表达 CD1a、CD83、CD86 等树突状细胞标记蛋白；B9 表达 GFP 和 巨噬细胞标记蛋白 CD68、F4/80；B10 表达 GFP 和成纤维细胞标记蛋白 FAP-α、α-SMA、 S100，均为鼠源宿主细胞。3 株细胞遗传学检测均为异倍体，在裸小鼠皮下致瘤率均 为 100%。 结论：在裸小鼠肝组织内建立的胶质瘤干细胞异位移植模型中，胶质瘤干细胞在 组织重构中可诱导其微环境中的间质细胞恶性转化，表明这种恶性转化在中枢神经系 统之外亦能发生，而且间质细胞恶性转化应为肿瘤异质性的主要原因，对进一步研究 肿瘤发生、演进与肿瘤微环境的关系具有重要意义。 关键词：双色荧光示踪；胶质瘤干细胞；荧光裸小鼠；肿瘤微环境；恶性转化 作 者：吴金鼎 指导教师：董 军（教授） 基金资助项目：国家自然科学基金81172400。 III III 胶质瘤干细胞诱导宿主肝组织内肿瘤间质细胞恶性转化的实验研究 英文摘要 Experimental research on malignant transformation of tumor stromal cells induced by glioma stem cells heterotopically inoculated in host liver Abstrcat Part I: Establishment and biological characteristics analysis of dual-color fluorescent tracing model of human glioma stem cells heterotopic transplanted in host liver Objective: To establish of red and green fluorescent tracing human glioma stem cells heterotopic transplantation model, for the purpose of further studies on het