节律基因mPer2对肿瘤细胞γ射线损伤敏感性的影响及其择时放疗的初步研究-生物医学工程专业论文.docx

缩略简称IR 缩略简称 IR irradiation 辐射 LLCs Lewis lung cancer cells 小鼠Lewis肺癌细胞 EMT6 mouse mammary carcinoma cell 小鼠乳腺癌细胞 CCGs clock-controlled genes 钟控基因 PE Plating efficiency 集落形成效率 SF survivaI fraction 生存分数 LD lethal damage 致死性损伤 PLD potential lethal damage 潜在致死性损伤 HR homologous repair 同源重组修复 NHEJ nonhomologous end-joining 非同源重组修复 Do mean lethal dose 平均致死剂量 Dq quasithreshold dose 准阙剂量 N extropolation number 外推数N值 HALo hour after light OH 开灯后小时 SSB single strands break 单链断裂 DSB double strands break 双链断裂 SCGE single cell gel electrophorcsis assay 单细胞凝胶电泳 PCNA proliferation cell nuclear antigen 增值细胞核抗原 PMA phorbol 12-myristate 13-acetate 乙酰肉豆蔻佛波酯 霸J¨大掌博士掌位论文节律基因roPer2对肿瘤细胞y射线 霸J¨大掌博士掌位论文 节律基因roPer2对肿瘤细胞y射线 损伤敏感性的影响及其择时放疗的初步研究 生物医学工程专业 研究生：朱彬 导师：王正荣教授 摘要 目的： 放射治疗是肿瘤治疗的主要手段之一，大约70％的肿瘤患者需要放疗的介 入。理论上，足够大的放射剂量能够杀死所有肿瘤细胞，但周围正常组织的放 射损伤限制了肿瘤治疗剂量的进一步增加，在有限治疗剂量下，寻求能够影响 细胞对射线敏感性的干预措施，无疑将对肿瘤的治疗具有重要意义。时间生物 学研究发现，生物体正常组织及肿瘤组织在细胞生理、生化等生长代谢的生命 活动中均存在生物节律性，根据生物体的节律特征进行施治，已证实可以提高 疗效并且降低机体对治疗措施本身的毒副反应。本课题即首先探讨了主要生物 节律基因之一roPer2对60Co-7射线敏感性的影响，通过对细胞增值以及DNA 损伤程度对roPer2影响细胞射线敏感性的高低作出判断，进而在体内、体外肿 瘤细胞mPer2节律表达的不同时间对细胞及荷瘤动物进行照射，观察择时放射 对肿瘤细胞及肿瘤组织生长情况以及不同时间照射对小鼠毒副作用的影响，最 后采用分子生物学、细胞生物学的研究方法对roPer2在射线照射过程中对其下 游钟控基因，包括DNA损伤修复基因，细胞增殖、凋亡等相关基因表达的调控 及可能的信号传导通路进行探讨，阐明节律基因roPer2影响细胞射线损伤敏感 性的分子作用机制，为肿瘤的治疗开辟新的途径。 方法： 1采用脂质体介导的方法将构建好的roPer2基因重组表达质粒 pcDNA3．1(+)-mPer2转染入肿瘤细胞，并以pcDNA3．／(+)-vector空载体及单独加 入脂质体空白组为对照，通过克隆形成实验检测不同剂量照射下细胞的克隆形 成率，进一步通过生存拟合曲线得出相应放射生物学参数(Do、Dq及N值)， 同时通过DNA断片分析及单细胞凝胶电泳实验观察不同组细胞受射线照射后 霸J¨大掌倬士掌位诧·文DNA损伤程度，从而对细胞内roper2高表达影响细胞对T射线敏感性的高低变 霸J¨大掌倬士掌位诧·文 DNA损伤程度，从而对细胞内roper2高表达影响细胞对T射线敏感性的高低变 化作出判断； 2．根据PMA可在体外刺激培养的细胞近日钟基因节律表达，结合第一部 分的研究结果，首先在体外对肿瘤细胞进行择时照射，选择PMA刺激后肿瘤细 胞内roper2节律表达的高峰与低谷的不同时间给予肿瘤细胞_r射线照射，通过 克隆形成、细胞增殖核抗原免疫组化观察细胞生长，增殖以及通过单细胞凝胶 电泳观察不同时间照射组细胞DNA损伤的情况；体内研究，采用授时因子发生 仪对荷瘤小鼠进行光暗周期程控调控，在肿瘤组织roPer2表达的峰值与谷值给 予小鼠印co吖射线照射，观察不同时间照射组肿瘤生长的抑制情况，肿瘤组织 石蜡切片HE染色以及PCNA免疫组化观察不同时间照射组肿瘤组织细胞的形 态及增值情况，通过体重、生存曲线观察不同时间照射组小鼠的毒副反应程度； 3．通过流式细胞术检测不同组细胞受射线照射后细胞周期阻滞及凋亡，通 过单细胞凝胶电泳检测不同组细胞DNA损伤修复情况，以及通过分子