金雀异黄素对小鼠人肝癌HepG2细胞移植瘤的抑制作用及其机制的实验研究-肿瘤学专业论文.docxVIP

{Ilul {Ilul l I[II I II II Ill[I t IIl Y1 900422 目 录 中文摘要 ．．1 英文摘要 ．．4 研究论义 金雀异黄素对小鼠人肝癌HepG2细胞移植瘤的抑制作用 及其机制的实验矽『究 前言月IJ商 · 8 材料与方法 8 结果 14 附图 ．．1 7 附表 ．26 {寸i仑 ．28 结论 33 参考文献 34 综述 金雀异黄素诱导肿j南细胞凋亡的移f：究进展 38 敛诩!『 。45 个人简历 46 中文摘要金雀异黄素对小鼠人肝癌HepG2细胞移植瘤的抑制作用及其机 中文摘要 金雀异黄素对小鼠人肝癌HepG2细胞移植瘤的抑制作用及其机 制的实验研究 摘 要 目的：通过实验研究金雀异黄素(Genistein)对肝癌细胞增殖抑制、 诱导凋亡及相关蛋白表达的影响，探ii]Genistein抗肝癌的作用机制，为肝 癌治疗提供新的力‘法及理论依据。 方法：1体外实验：体外培养人肝癌细胞HepG2，采用四甲基偶氮唑 蓝(tetrzolium—based colorimetric assay，MTT)比色法测定不同浓度 Genistein作用于该细胞24h、48h、72h后对其增殖抑制作用；2体内实验： 取健康雄性BALB／c小鼠(40只)称一霞，将HepG2细胞接种于小鼠右侧 颈背部皮下，建屯肝癌HepG2细胞小鼠模型。当全部小鼠可以触及到瘤 体时，记录肿瘤体积。将小鼠按肿瘤体积编号，采用随机数字法将小鼠随 机分为5组(每绀8只)：阴性对照组；Genistein低剂量组；Genistein中 剂量组；Genistein高剂量纰；5一氟尿嘴啶组(5-Fu)，荷瘤成功后第二天 开始采J{1腹腔}乒射给约力‘式给约：附陡对照组给：j；生理盐水(含二甲基亚 砜DMSO1％)O．2ml，每大给药 次，连续14天；实验组分别给予不同 剂量的Genistein(5mg／kg、10mg／kg、20mg／kg)，方法同阴性对照组；5一Fu 组给予5．Fu O．2ml(1 6．5 mg／m1)，每周给药一次，共两次。在给药期间观 察小鼠 般情况，记录小鼠体雨和肿瘤大小。所有小鼠在给药后第15天 颈椎脱臼处死，剥瘤、称重，计算肿瘤体积和抑瘤率，应用流式细胞仪测 定细胞周期分布及凋亡率。普通光学显微镜及透射电镜观察细胞形态学改 变；应用免疫组化法检测移植瘤组织Survivin、Caspase．3蛋白的表达情况。 结果： 1体外实验结果 Genistein抑制HepG2细胞增殖：MTT检测结果显示：不同浓度Genistein 对HepG2细胞增殖均有抑制作用。Genistein(10、20、30、40、60、80、 12099／m1)作用于HepG2细胞24h、48h、72h后检测， OD值均有不同 程度下降，与阴性对照组相比，差异有统计学意义(P0．01)。各处理组 间比较差异同样具有统计学意义(PO．01)，且伴随药物浓度的增加、作 中文摘要 中文摘要 用时间的延长，抑制率逐渐升高，即表明Genistein对HepG2细胞增殖的 抑制作用呈明显时间一剂量依赖效应。 2体内实验结果 2．1 Genistein I归旺抑制小鼠肿瘤的生长：各组小鼠处死后肿瘤体积的比 较，Genistein低、-1一、高剂量组的肿瘤体移{随着药物浓度的增加而逐渐减 小，肿瘤体积(mm3)分别为：189．625±85．590、126．000±42．050、 73．000 4-_34．034， 5-Fu组肿瘤体积(mm3)为52．000±31．0333，均明 显低于阴性对照组肿瘤体积(mm3)326．875±178．922，差异有统计学意 义(P0．01)，Genistein低、中、高剂量组与5．Fu组的瘤重明显低于阴性 对照组，差异例样具有统计学意义(O．01)，Genistein低、中、高剂量组 的抑瘤率随着药物浓度的增大而增加，分别为：8．70％、26．10％、40．15％。 而5一Fu组的抑瘤率为55．40％，明显高于Genistein各剂量组。 2．2流式细胞术榆测结果显示：Genistein低、中、高剂量组G2／M期细胞 逐渐增多，G0／G1期细胞逐渐减少，该作用有剂量依赖性，与阴性对照组 相比，差异均具有统计学意义(P0．01)，提示Genistein可阻滞细胞周期 于G2／M期。Genistein低、中、高剂量组的凋亡百分率随着药物剂量的增 加而逐渐升高，分别为：10．58±3．27％、19．63±1．29％、32．24±1．64％， 5--Fu组凋亡百分率为46．81±3．67％，均明显高于阴性对照组凋亡率 2．09±0．69％，差异有统计学意义(尸0．01)。 2．3光镜下观察刖：癌移植瘤组织