金枪鱼肌肉中氧合肌红蛋白的制备及其氧化特性研究-水产品加工与贮藏工程专业论文.docxVIP

金枪鱼肌肉中氧合肌红蛋白的制备及其氧化特性研究 金枪鱼肌肉中氧合肌红蛋白的制备及其氧化特性研究 摘要 金枪鱼是营养价值极高的鱼类之一，其在加工生鱼片的过程中产 生会很多碎鱼肉，未能得到有效的回收利用，由于其肌肉中的肌红蛋 白含量比其它鱼类高10．100倍，具有极高的利用价值，也奠定了本实 验实施的基础。 肌红蛋白作为一种血红素蛋白，对治疗贫血和增强人体免疫力等 有较好效果，在医疗诊断上也有很大的用途，而肌红蛋白的提取纯化 一直是一个难点，到目前为止，国内研究得很少，只有从猪肉中分离 提取氧合肌红蛋白的报道，而在其它原料中未曾涉及，更没有在废弃 物中加以利用的例子存在。 本文研究了从金枪鱼肌肉中提取氧合肌红蛋白的最佳条件，并通 过缓冲液提取、硫酸铵沉淀、DEAE．Sepharose FF离子交换柱层析、 Sephedex G．75凝胶层析等步骤，提取纯化氧合肌红蛋白，研究了影响 氧合肌红蛋白自动氧化的一些因素，并测定了在不同温度环境下贮藏 时的金枪鱼鱼肉中肌红蛋白自动氧化的情况。 本论文对提取条件进行逐项研究确定，对提取氧合肌红蛋白的最 佳条件进行了探索，通过分光光度计扫描比较氧合肌红蛋白含量的高 低，得到了最佳实验条件：2．5倍体积于样品质量、O．010mol／L pH8．6 Tris．HCl缓冲液、提取时间1．5小时、饱和度为90％的硫酸铵盐析。 由硫酸铵沉淀得到的粗产物，经截留分子量为10，000的透析袋 由硫酸铵沉淀得到的粗产物，经截留分子量为10，000的透析袋 透析后除去了盐类和一部分杂蛋白，再由DEAE-Sepharose FF离子交 换柱分离得到了氧合肌红蛋白和另一杂蛋白的混合物，最后通过 SephadexG．75凝胶层析，得到了纯化的氧合肌红蛋白。处理各过程得 到的氧合肌红蛋白经过SDS．PAGE电泳鉴定纯度。 对分离提取的氧合肌红蛋白的性质进行了研究，测定pH、离子强 度、温度三个因素对氧合肌红蛋白自动氧化的影响，得到了随pH、离 子强度、温度的升高氧合肌红蛋白自动氧化速率的变化趋势：随着pH 的升高，氧合肌红蛋白的自动氧化速率逐渐降低；随着离子强度和温 度的升高，自动氧化速率均呈逐渐升高趋势。 对不同温度环境下肌红蛋白自动氧化的情况，实验选用新鲜金枪 鱼鱼肉为实验材料，置于不同温度(O℃、．18℃、．70℃)冰箱内，定 期称取一定质量的鱼肉提取肌红蛋白，经分光光度扫描仪扫描，求得 A580／A525和A630，A525比值分别作为氧合肌红蛋白含量和高铁肌红蛋白 比例变化的标志。实验得到了肌红蛋白在不同温度条件下自动氧化的 情况，在一定程度上反映了金枪鱼肌肉色泽和新鲜度的变化。 通过对氧合肌红蛋白性质的研究和对不同温度环境下肌红蛋白自 动氧化的研究所得到的结果，在一定程度上对我国金枪鱼的加工贮运 及废弃碎鱼肉的利用都有一定的参考价值。 关键词金枪鱼肌肉，肌红蛋白，制备，性质 Preparation Preparation and oxidation character studies of Oxymyoglobin from Tuna meat Abstract Tuna is a fish species of great value．Large quantity of their drossy meat is thrown away without reuse during processed to sashimi．And there exists high content Myoglobin，which is times more than other fishes． Myoglobin，a kind ofheine protein，is useful in treating anaemia,helping immunity and iatrical diagnosis．However，the purification is a difficult problem in the world．Up tO the present，only one group of people has gained pure Oxymyoglobin from pork in China and none reports have been found about pick—up from castoff． The paper has studied the best conditions for the pick-up．Through pick-up， deposition bY Armnonium Sulfate，Ion-exchange column and gel-filtration chromato