结晶紫降解菌株的分离鉴定、降解特性及降解机制研究-建筑与土木工程专业论文.docxVIP

万 万方数据 安徽建筑大学 本论文经答辩委员会全体委员审查，确认符合安徽建筑大学硕士 学位论文质量要求。 答辩委员会签名 主席:  会榜首 伫l:l:- 也女号 傲得 委员:斗争弘生易坏的 r y! 二支倒也f号 及均 ;11叙 二374 仰μ t-t 列协 导师: 爱z应 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外， 论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得 安徽建筑大学 或其他教育机构的学位或证书而使用过的材 料。与我一 向工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并 表示谢意。 学位论文作者签名:才}j你舔 签字日期 :20 / 5年斗 月{日 导师签名: ?她 签字日;期 :)Dcl年 (阴阳 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解安徽建筑大学有保留、使用学位论文的 规定，即:研究生在校攻读学位期间论文工作的知识 产权单位属于二主继 建筑大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印 件和 磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人投权 安徽建筑大学 可以将学 位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文 。 (保密的学位论文在解密后 适用本授权书) iltli-iiwA: iltli-iiwA:liai--iliiiii 寸 签字日期 :).01):年升月|日 签字日 期 :;?c? 年 u月 /日 摘 要 结晶紫是一种人工合成的三苯甲烷类染料，常用于纺织、印染、油墨工业、 环保、矿业、钢铁、医药和日用化学品的分析。结晶紫含有复杂芳香环结构，因 而化学稳定性高、生物可解性低，因而在废水中能够积累导致严重的地表水和地 下水污染。环境毒理学表明，结晶紫具有中毒、致癌、致畸和致突变等毒副作用。 由结晶紫造成的水源污染和水产品的安全问题已引起了广泛重视并急需解决。生 物降解是清除环境污染的有效途径之一，具有高效、安全、成本低、无二次污染 等优点。因此筛选高效降解结晶紫的微生物资源，探索其降解的作用机理，充分 发挥其降解能力，具有重要的理论意义和应用价值。本课题研究的目标是分离出 能够高效降解结晶紫的降解菌株，并对该菌株在各种环境条件下降解结晶紫的特 性进行研究，同时探索菌株降解结晶紫的机制，以期为结晶紫染料废水的处理工 作提供科学依据。 从长期受染料污染的污泥中分离出一株能够对结晶紫降解脱色的菌株 SJ-1。 根据形态、生理生化和 16S rRNA 基因序列分析，将菌株 SJ-1 归属到鞘氨醇单胞 菌属（Sphingomonas sp.）。本文探索了降解菌株 SJ-1 的最适生长条件，菌株 SJ-1 生长最适温度为 30℃，最适生长初始 pH 为 7.0。随着通气量的增加，菌株的生长 呈上升趋势。在供试的几种碳氮源中，对蛋白胨和酵母粉的利用为最好。在 LB 培养基中，SJ-1 的生长曲线，0-6 h 为延滞期，6-24 h 为对数生长期，24 h 后为稳 定期。 对降解菌株降解特性的研究表明，使用 LB 培养基，菌株 SJ-1 在 3 d 可使 200 mg/L 结晶紫几乎完全脱色。该菌株降解结晶紫的适宜温度为 25～30 ℃，适宜 pH 值为 6.0～8.0；通气量对 SJ-1 影响较小，在缺氧条件下也可较好地降解结晶紫， 4 h 时通气量较小试验组（装液量≥125 mL）降解率仍大于 40%。 在对 SJ-1 结晶紫降解酶的酶学特性的研究中，建立了酶学反应体系：总体积 5 mL，PBS 4.85 mL（0.1 mol/L，pH=7.0），结晶紫 50 μL（终质量浓度 200 mg/L）， 酶液 100 μL。反应 10 min 后冰浴终止，用丙酮提取结晶紫残留，根据结晶紫减少 量确定酶活。本文中，一个酶活单位是指 1 min 内去除 1 μmol 结晶紫所需的酶量。 实验表明：该结晶紫降解酶在 60℃以下酶活损失较慢，pH6.0-8.0 时能保持较高 的酶活；甲醇和异戊醇对该酶活性影响较小，而二氯甲烷和丙酮对该酶活性影响 较大。Zn2+、Ca2+、Fe2+、Cu2+、Co2+等 10 种金属离子中，Fe2+对结晶紫降解有促 进作用，其他金属离子对结晶紫降解酶都有不同程度的抑制作用。酶的诱导和定 域实验表明,SJ-1 的结晶紫降解酶位于细胞外，属组成型表达酶。 根据已报道的三苯甲烷还原酶基因序列设计引物，通过 PCR 方法从降解菌 I SJ-1 中克隆到了三苯甲烷还原酶，其碱基数为 864 bp，编码 288 个氨基酸序列。 通过 SJ-1 中 tmr2 基因序列与 GeneBank 中同源序列的比较发现，在基因水平上， 八