结直肠癌中RNF43基因突变的病理意义-病理与病理生理学专业论文.docxVIP

逝堑态望亟±堂焦途塞 逝堑态望亟±堂焦途塞 空塞撞墓 结直肠癌中RNF43基因突变的病理意义 中文摘要 结直肠癌是严重威胁人类健康的恶性消化道肿瘤之一，对结直肠癌发病机制 以及防治策略的研究具有十分重要的现实意义。在经典的正常上皮．腺瘤一腺癌序列 中Wnt通路激活是重要的早期环节，对Wnt通路信号强度调控的研究有助于阐明 结直肠癌的发病机制。 环指蛋白43(Ring finger protein 43，RNF43)是Wnt信号通路中重要的负向 调控因子之一，具有清除细胞膜Wnt受体以及阻滞TCF4(T cell factor 4)入核的 功能，在通路中发挥Wnt信号抑制作用。RNF43的异常表达、突变等改变对Wnt 信号通路的活化程度有重大影响，与肿瘤的发生发展有密切联系，在临床可能具 有较为重要的意义。有研究报道RNF43的突变在高频微卫星不稳定(}n曲．frequency microsatellite instability，MSI．蛐的肿瘤中发生频率较高，其突变情况与微卫星不稳 定性相关。RNF43的截短突变绝大多数发生在MSI—H情况下且与APC突变极少 同时发生。这提示RNF43功能缺失对Wnt通路激活程度的影响很可能是MSI类 型结直肠癌发生机制中重要的一环，对其基因突变情况及微卫星不稳定情况的综 合分析可能有助于阐明其在临床的功能效应。对比在微卫星稳定／微卫星不稳定病 例中RNF43基因的改变情况与临床参数、预后之间的差异，有助于寻找新的预测 标志物、为个体化治疗提供指导，具有重要的实际应用价值和理论意义。 KRAS／BRAF的突变状态与微卫星不稳定状态均可以作为预测预后的指标，且均与 耐药存在关联，因此我们还对其与KRAS／BRAF突变状态的关联进行了分析，以 深入探讨RNF43对预后可能存在的效应。 本次研究选取的446例散发性结直肠癌样本均取自经福尔马林固定一石蜡包埋 Ⅱ 万方数据 逝、江盘堂亟±堂焦迨塞 逝、江盘堂亟±堂焦迨塞 虫窒擅耍 的患者手术切除组织。RNF43的基因外显子区段存在多个微卫星位点，根据RNF43 突变与微卫星不稳定性的相关性推测，这些位点可能具有较高的突变率。因此我 们先筛选出RNF43外显子序列上存在的这些微卫星位点并设计了针对性引物，在 提取样本基因组DNA后，用PCR方法对这些微卫星区段进行扩增，并使用Sanger 测序方法对这些位点的突变情况进行了检测。之后我们运用SPSS软件(version 20) 分析了这些病例中RNF43突变与微卫星不稳定性状态、KRAS、BRAF等基因的 突变情况(由本实验室在之前基于焦磷酸测序技术和多重荧光PCR-毛细管电泳的 临床分子检测方法获得)、患者的临床病理学参数(性别、年龄、肿瘤部位、浸 润深度、大体类型和组织学类型、淋巴结转移及远处转移、TNM分期等)、预后 生存数据等信息的相关性。我们还对RNF43在肿瘤组织的表达做了免疫组化检测， 并分析了RNF43突变对其表达情况的影响。本次研究试图阐明RNF43在结直肠癌 人群中的突变情况，探讨RNF43基因突变情况与上述各因素之间的联系，分析这 些改变情况与临床参数的关联及对预后的影响。 本次研究共发现结直肠癌人群中存在p．Gly659fs、P．Argll7fs、G．350GA、c．816 TC四种RNF43基因的突变，其总体突变频率分别为9．2％、1．1％、54．5％、o．91％。 p．Gly659fs在MSI．H状态下的突变率为28．6％，在MSI-L／MSS状态下的突变率为 3．1％。p．Argll7fs在MSI．H状态下的突变率为3．6％，未在MSI．L／MSS状态下发 现此种突变。c．350GA的突变率在不同微卫星状态下未发现差异。发现p．Gly659fs 与肿瘤部位(位于结肠、位于右半大肠)相关，与组织学类型(粘液腺癌)、组 织学分化(低分化)相关，携带此突变的患者较少发生远处转移；c．350GA与组 织学类型(腺癌)、组织学分化(高分化)相关，这些相关性体现在此位点发生 纯合突变的情况下，而此位点发生杂合型突变时其各项临床参数相比未突变组则 均无差异。当患者携带RNF43基因的p Gly659fs突变时，再发生BRAF突变的患 者五年生存率低于无BRAF突变者。暂未发现RNF43的突变与其在肿瘤组织的表 达之间存在相关性。 Ⅲ 万方数据 逝、江态堂亟±堂焦逾塞 逝、江态堂亟±堂焦逾塞 !主塞擅要 本次研究目前可以得出以下结论： 1、RNF43在结直肠癌中突变率高。 2、p．Gly659fs、p．Ar9117fs两种突变与微卫星不稳定存在相关性，其在MSI-H 状态下的突变率显著高于在MSI—L／MSS状态下的突变率。 3、RNF43基因的p．Gly659fs突变是结