结球甘蓝抗tumv基因的aflp标记研究-蔬菜学专业论文.docxVIP

——』兰垫!!兰篷兰垒!兰塑主竺壅生堡墨：丝堡茎堇垫!!塑∑垒璺塑垒!曼里堑!垦塑塞摘 ——』兰垫!!兰篷兰垒!兰塑主竺壅生堡墨：丝堡茎堇垫!!塑∑垒璺塑垒!曼里堑!垦塑塞 摘 要 结球甘蓝(Brassica oleracea VaE capitata)简称甘蓝，属于十字花科芸薹属，原产 于地中海沿岸，是世界上广泛种植的一种重要蔬菜作物。病毒病是甘蓝的一种重要 病害。TuMV(Turnip Mosaic Virus)是甘蓝病毒病的主要毒原，主要靠蚜虫以非持 续性方式传播。采用化学药剂防治病毒病效果不明显，培育抗病品种是一种有效的 防治途径。传统育种在抗病性转育的过程中，需要人工接种后，根据表型用目测法 进行抗病性鉴定，存在费时费力、转育效率低、困鉴定的误差有时容易使目标性状 丢失等问题。 分子标记辅助选择(Marker-Assisted Selection，MAS)为在植物抗病育种中目标 性状的选择提供了一条快速有效的途径。AFLP标记因其具有多念性高、重复性好 等优点，在目标基因标记方面显示出』。泛的应用前景。 本研究以中国农业科学院蔬菜花卉研究所育成的甘蓝感病自交系01—16-5．7和 抗病自交系20．2—5及其配制的Fl代自交后构建的如代分离群体为试材。用侵染我 国甘蓝的TuMV主导致病株系——TuMV—c4对亲本和F2的各个单株进行室内人工接 种，利用酶联免疫吸附测定法对各植株TuMV的抗性进行鉴定。根掘鉴定结果采用 BSA法选取不同F2单株构建两对抗感池，应用AFLP分子标记技术筛选与甘蓝抗 TuMV基因连锁的分子标记，在分子水平上为甘蓝抗TuMV辅助育种提供一种快速 有效的方法。主要结果如下： (1)在温室隔离条件下进行苗期人工接种TuMV-C4株系，经过酶联免疫吸附检 测，F2代分离群体中抗病单株和感病单株的比例为3．10：1，对检测结果进行f适合 性检验，x C2=0．053x f1，0．05)2=3．84，证明其符合3：1的孟德尔遗传分离规律， 表明该群体中对TuMV的抗性受显性单基因控制。 (2)通过BSA法，从F2代分离群体中选用极端抗病和极端感病的不同单株构建 两对抗感池。应用AFLP技术，对与甘蓝抗TuMV基因连锁的AFLP标记进行了筛 选，以8个EcoRI引物，16个MseI引物，组成128个引物组合对抗感池进行筛选， 筛选出E2。M6l引物组合在两对抗感池中均出现一条相同差异带，其片断大小为 530bp，暂将浚标记命名为E24M61—530。 (3)用E24M6l引物组合对亲本、建池单株和其他的F2单株迸一步检测，并重复 三次，结果稳定。在所检测的172个F2群体单株中，只有23株发生交换，表明筛 选到的AFLP标记E24M61．530与甘蓝抗TuMV基因连锁。经最大似然函数计算， Kosambi函数校正，其遗传距离为14．44cM。 关键词：甘蓝TuMV AFLP分子标记 华中农业大学2004硕士研究生论文·鲒球甘蓝抗TuMV基因的AFLP标记研究AFLP 华中农业大学2004硕士研究生论文·鲒球甘蓝抗TuMV基因的AFLP标记研究 AFLP Markers Linked to Turnie Mosaic Virus—Resistance Gene in Cabbage(Brassica oleracea vat,capitata) Abstract Cabbage(Brassica oleracea Var．capitata)is a worldwide vegetable crop belonging to the 2Prassica of family Cruciferae，and it originates from the Mediterranean Coast，The incidence of virus disease has caused tremendous effect and economic lOSS on the production of cabbage．TuMV(Turn加Mosaicrus)is one of the major pathogens of virus disease in cabbage．which is inffoduced into plant ceils in the non—persistent transmission mode during aphid probing or feeding．The application of the pesticides to prevent the spread of TuMV is 1egs effective．So breeding the disease—resistanl variet