金粉蕨素抗氧化应激诱导的内皮细胞凋亡与MAPK活性的关系-药理学专业论文.docxVIP

研究生姓名：庹勤慧 研究生姓名：庹勤慧 南华大学问等学历人员硕{二学位论文 金粉蕨素抗氧化应激诱导的内皮细胞凋亡 与Lt6,PK活性的关系 研究生：庹勤慧 专业：药理学 导师：廖端芳教授 摘 要 研究背景：血管内皮细胞受损是动脉粥样硬化触发的早期重要事件，受损内皮细胞的 凋亡不仅影响着动脉粥样硬化患者斑块的稳定性，而且抑制病变冠脉正性重构。内皮细胞 凋亡还与高衄压、糖尿病等疾病密切相关，并加重这些疾病的心血管病变。因此，血管内 皮细胞在心血管疾病的发生、发展以及愈后中起着非常重要的作用，保护内皮细胞功能， 抑制内皮细胞凋亡是药物防治心血管疾病特别是抗动脉粥样硬化和再狭窄的热门靶点之 一。 金粉蕨素是新型黄酮类化合物，结构与植物雌激素中的异黄酮相似，我们在离体血管 环上观察到金粉蕨素促进内皮细胞释放一氧化氮和前列环素，保护内皮依赖性舒张功能， 对抗溶血性磷脂酰胆碱引起的血管环收缩；还可以对抗肝脏脂质过氧化作用，提示金粉蕨 素有一定的抗氧化和保护内皮的作用。但金粉蕨素对体外培养的细胞氧化应激损伤及凋亡 的影响未见报道，本实验旨在探讨金粉蕨素对过氧化氢诱导内皮细胞凋亡的影响及机制， 为开发药物新的药理作用提供理论依据。 方法：体外培养的人脐静脉内皮细胞按如下分组处理(1)正常对照组：(2)H如损伤 组：(3)金粉蕨素+H如组：(4)溶媒对照组：(5)阳性药物Genistein-州如组。首先用H如 研究生姓名：庹勤慧 研究生姓名：庹勤慧 南华大学同等学历人员硕扣学位论文 孵育细胞4小时造成急性氧化损伤模型，采用MTT法和LDH法检测金粉蕨素对损伤内皮功 能的保护作用，然后延长心02孵育时间到24小时，用流式细胞术和Hoechst33258染色鉴 定内皮细胞凋亡率；在H籼诱导的内皮细胞凋亡模型上，应用MTT法、流式细胞检测法和 Tunel法检测药物对细胞活性和凋亡率的影响，用Western-blot检测不同时间点细胞中 ERKl／2、P38[㈣oK的表达和第24小时caspase3活性。 结果：琏0b孵育内皮细胞4小时，细胞活性下降，乳酸脱氢酶释放增多；孵育组时间 延长到24小时，细胞荧光染色出现核浓缩、碎裂等凋亡特征，凋亡率升高：同时伴有 p38MAPK、caspase3活性增强，ERKl／2活性在早期增加，但随时间延长表达下降。而用不同 浓度金粉蕨素预先保护可见(1)细胞增殖活性呈浓度依赖性升高，LDH释放减少；(2) 流式细胞仪结果显示细胞凋亡率呈浓度依赖性下调(15．1±1．2％、12．6±O．9％、8．2+0．8 ％VS 22．7±3．9％，pO．05)： (3)Tunel法染色细胞镜下观察，棕褐色深染的阳性细胞 明显减少，镜下凋亡细胞计数结果与流式检测相仿；(4)从30分钟起就开始抑制p38K4．PK 磷酸化；(5)ERK活性上调出现在4小时之后；(6)细胞中caspase3活性下降 结论：1．金粉蕨素可以拮抗H如诱导的内皮细胞凋亡，保护内皮细胞免受氧化应激损 伤：2．金粉蕨素通过激活ERKl／2、抑制p38m2K磷酸化，下调caspase3活性，抑制内皮细 胞凋亡。 关键词：金粉蕨素，内皮细胞，细胞凋亡，过氧化氢，p38MAPK，ERKl／2 本实验由卫生部基金(项目号981345)，湖南省中医药局重点项目(项目号2000006)。 湖南省教委基金(项目号988100)资助。 研究生姓名：庹勤慧 研究生姓名：庹勤慧 南华大学埘等学历人员颂i：学位论文 Correlation between Protective Effects of Onychin and MAPK Signal Transducfion Pathway on Apoptosis ofVascular Endothelial Cells Induced by Oxidative Stress Abstract Background：Endothelium岫my is considered to be a11 i11itia】event in the development of atherosaderosis．Endothelium injury may lead to endothelial cells(ECs)apoptosis，which has major potentia