金龟子绿僵菌CQMa102致病相关基因CuAO的功能分析-微生物学专业论文.docxVIP

重庆大学硕士学位论文缩略词 重庆大学硕士学位论文 缩略词 VI VI 缩 略 词 DEPC 焦碳酸二乙酯 dNTP 脱氧核糖核苷三磷酸 cDNA 互补 DNA EST 表达序列标签 bp 碱基对 rpm 每分钟转数 SDS 十二烷基磺酸钠 EDTA 乙二胺四乙酸 EB 溴化乙啶 RT 反转录 PCR 聚合酶链式反应 LD-PCR 长距离聚合酶链式反应 Tris 三(羟甲基)氨基甲烷 Blast 局部比对搜索工具 NCBI 美国国立生物信息技术中心 SSH 抑制消减杂交 重庆大学硕士学位论文1 重庆大学硕士学位论文 1 绪 论 PAGE PAGE 10 1 绪 论 1.1 研究的背景与意义 蝗虫是一种重要的农牧业害虫，我国分布着包括东亚飞蝗、亚洲飞蝗和西藏 飞蝗 3 个亚种，其中分布最广、危害最严重的是东亚飞蝗。东亚飞蝗（Locusta migratoria manilensis, Meyen）属昆虫纲，直翅目，蝗科。取食禾本科植物的茎和 叶，成虫全天取食，可集体迁飞，给农作物带来毁灭性的灾害。因此，东亚飞蝗 的研究以及蝗灾防治历来都受到人们的关注[1]。 化学防治法是目前主要的蝗灾的防治方法，具有快速、高效等优点，但同时 也带来了一系列不容忽视的问题。生物防治法中的微生物防治法具有无公害、无 残留、害虫不易产生抗性等优点，前景很好[2]。 目前，国内外治蝗防灾的措施包括化学防治、生态防治和生物防治措施综合 治理蝗虫，在引进国外先进技术的同时，加强国内灭蝗的研究工作，使蝗灾基本 得以控制，取得了惊人的成绩[1-5]。 近年来，世界各国相继出台了对化学农药特别是高毒化学农药的禁止、限用 的法规。美国环保署1998年首先指定了包括马拉硫磷在内的40余种有机磷农药必 须在1999年8月重新评价登记，其中半数的有机磷农药对儿童的安全系数要增加 3-10倍[6]。利用微生物农药防治病虫害具有以下优点：流行病发生可自然控制病虫 害种群数量，持效期长；减少化学农药的使用量；减少环境污染；不杀伤天敌， 维持生态平衡；对非靶标生物无害；害虫不易产生抗性；易于生产。在微生物农 药中，昆虫病原真菌杀虫剂在昆虫的生物防治中起着相当重要的作用。 昆虫病原真菌是昆虫病原微生物中最大的一个类群，由真菌致病死亡的昆虫 约占全部病原微生物致病死亡的 60%[7]。虫生真菌具有独有的侵染方式，即可通过 宿主体壁侵染害虫。这在防治刺吸式口器害虫上是其它微生物杀虫剂无法替代的。 如蚜虫和叶蝉，它是刺吸式口器害虫，病原细菌、病毒等主要经口传染的微生物 很难侵染它们，但昆虫病原真菌却比较容易从害虫的体表侵入，很好的控制了虫 害[8 ,9] 。 目前，国内外应用和研究最多的昆虫病原真菌有白僵菌（Beauveria bassiana）， 绿僵菌（Metarhizium anisopliae），和蜡蚧轮枝菌（Verticillium lecanii），玫烟色 拟青霉（ Paecilomyces fumoaorocue）等10 多种真菌。我国已成功应用白僵菌防治 多种卫、农、牧、林生害虫，其中松毛虫应用白僵菌防治在面积上居世界首位[10]。 由于虫生真菌在生物防治中的巨大潜力，国际上加快了对虫生真菌的作用机理 研究和应用技术的研究。有统计显示，对虫生真菌的研究近年来已经超过了细菌， 一些发达国家也在相继启动大型研究计划，如美国的“昆虫病原基因组资源”（The Entomopathogen Genome Resource）研究计划，以绿僵菌为模式，开展表达序列标签 （Expressed sequence tag，EST）研究项目，用ESTs制造基因芯片来研究金龟子绿僵 菌在侵染等致病过程中全基因组的表达量的变化，揭示虫生真菌对环境变化的应答、 对宿主的侵入过程、在宿主体内繁殖和逃避寄主免疫反应等机制 (http://TEGR.)。 1.2 绿僵菌的研究进展 绿僵菌（Metarhizium）是最早用于生物防治的一种微生物，也是高效的杀虫 真菌之一，对它在防治害虫方面的研究与实践已有上百年历史，主要应用于蝗虫、 蟑螂、白蚁等的防治。研究发现这种真菌能感染并致死全球大约 200 多种昆虫。 1883 年 Sorokin 根据模式种金龟子绿僵菌(M. anisopliae)建立绿僵菌属，其分 类地位隶属于真菌门 (Eumycota) 、子囊菌亚门 (Ascomycotina) 、核菌纲 (Pyreno-mycetes)、球壳菌目(Sphaeriales)、麦角菌科(Clavicipitetaceae)。1967 年 Tulloch 对此属的系统研究[11, 16]，把本属归为 2 个种，包括金龟子绿僵菌和黄绿绿 僵菌，金龟子绿僵菌包括小孢变种和大孢变种。小孢变种即原变种