专题二十二基因工程.docxVIP

专题二十二 基因工程 考点分布 基因工程的原理及技术 基因工程的应用与发展 考纲内容 基因工程的诞生 基因工程的原理及技术 基因工程的应用 蛋白质工程 命题趋势 多以基因工程方面最新研究成果为载体考查基因工程的工具与操作程序，基因工程的题目多与 胚胎工程、微生物的培养、克隆技术、植物组织培养等内容联系起来。 基因工程的原理及技术 一.基因工程的概念与操作工具分析 4 ?基因工程的概念 基因工程别名 基因拼接技术或DNA重组技术 操作环境 生物体外 操作对象 基因 操作水平 DNA分子水平 基本过程 剪切 拼接 导入 表达 结果 人类需要的基因产物或生物类型 2?分子手术刀——限制性核酸内切酶(限制酶) (1 )存在：主要存在于原核生物中 特性：一种限制酶只能识别一种特定的核昔酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA 分子 切割部位：磷酸二酯 切割后末端的种类：黏性末端和平末端 A IG——c A I G——c T— A T— A A I T A A I T C 3 ?分子缝合针——DNA连接酶 (1 )作用：将限制酶切割下来的DNA片段拼接成DNA分子 (2)类型 种类来源大肠杆菌功能特只能连接黏性末端T4 DNA连接酶T4 种类 来源 大肠杆菌 功能特 只能连接黏性末端 T4 DNA连接酶 T4噬菌体 可以连接黏性末端和平末端，但连接平末端 效率低 相同点 都是催化磷酸二酯键的形成 4 ?“分子运输车”——载休 (1 )载体的种类 质粒(最常用) 其他：入噬菌体的衍生物、动植物病毒等 载体必备的条件 能在受体细胞中复制并稳定保存 具有一个至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入 具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择 载体的作用 作为载体工具，将目的基因送入受体细胞 在受体细胞内对目的的基因进行大量复制 补充： 基因工程中有关酶的比较 作用底物作用部位作用特点作用结果限制(性内切)酶DNA分子磷酸二酯键形成黏性末端或平-4— XlLi 木师DNA连接酶DNA分子片 段磷酸二酯键DNA聚合酶 作用底物 作用部位 作用特点 作用结果 限制(性内切)酶 DNA分子 磷酸二酯键 形成黏性末端或平 -4— XlLi 木师 DNA连接酶 DNA分子片 段 磷酸二酯键 DNA聚合酶 脱氧核昔酸 解旋酶 DNA分子 形成重组 DNA分子 磷酸二酯键 只能将单个脱氧核 昔酸添加到脱氧核 昔酸链上 形成新的DNA分子 碱基对间的氢 将DNA两条链之间 的氢键打开 形成单链DNA分子 基因工程的操作步骤 1?获取目的基因的方法 (1 )从基因文库中获取目的基因 a.基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA短片段，导入受体菌的群体中储存，各个 受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。 b.基因文库的分类：按外源DNA片段的来源分类 基因组DNA文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了 一种生物的部分基因，如cDNA文库 :入受体菌种储存基因文库的构建方法 :入受体菌种储存 提取某种生物的全部DN_^适当的限制七一定大小的DNA片将dna博殳 基因组文库 某种生物的单链mRIJ7宀妊二 体菌种储存cDNM^ ? 构建基因文库的目的 单链互补匚?二土仝二?cDNA片段 单链互补匚?二土仝二?cDNA片段 亠受 a.反转录法：mRNA 单链DNA a.反转录法：mRNA 单链DNA 双链DNA (反转录 b.人工合成： 抑制蛋白质的氨基酸序列——mRNA核昔酸序列——推测目的基因的脱氧核昔酸序列——合 成目的基因 (3)利用PCR技术扩增目的基因 PCR是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术(指数扩增) PCR的反应过程：PCR—般要经历三十多个循环，每次循环分为变性、复性、延伸三步。 2 ?基因表达载体的构建——基因工程的核心 (1 )目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能 够表达和发挥作用 目的基因：能端控制特定性状(2 )基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因 目的基因：能端控制特定性状 启动子:转录的起点.在转录过程中起 调控作用 标记基因:鉴别受体细胞中是否含右目的基因:转录的终点.在转录过程中起 调控作用 标记基因:鉴别受体细胞中是否含右目的基因 标记基因一般为抗生素基因或荧光基因等，其作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因(目的 基因是否导入成功) (3 )方法 用同一种限制性核酸内切酶分别切割目的基因和载体DNA (如质粒)，形成相同的黏性末端， 用DNA连接酶将目的基因和载体DNA连接在一起，形成重组DNA分子。 3?将目的基因导入受体细胞 细胞类型 常用方法 受体细胞 转化过程 植物细胞 农杆菌转化法(基因枪 法、花粉管通道法) 体细胞 将目的基因插入