酒精性肝病发病机制及脂肝宁防治ald作用机理的实验研究-中西医结合临床专业论文.docxVIP

中文摘要肝细胞脂肪变性和纤维化程度，取部分肝组织立即冰冻切片行苏丹Ⅳ染 中文摘要 肝细胞脂肪变性和纤维化程度，取部分肝组织立即冰冻切片行苏丹Ⅳ染 色，另取肝组织固定于4％中性福尔马林溶液，石蜡包埋，5 u m切片行 HE和天狼红染色，结果如下。 1．1肝组织病理学改变：4周大鼠肝组织出现肝小叶中央静脉周围肝细胞 脂肪变性，随着造模时间的延长肝细胞脂肪变性逐渐加重，肝小叶内坏死 灶明显增多和纤维组织增生，16周大鼠肝细胞呈现弥漫小泡性脂肪变性， 窦周纤维化，汇管区纤维组织增生并有纤维间隔形成，冰冻切片苏丹Ⅳ染 色显示大量红色脂滴分布于肝细胞内。 1．2血清生物化学指标的变化：随着造模时间的延长，大鼠血清ALT和AST 逐渐升高，CHE降低，与正常对照组比较尸0．05或尸0．01。 1．3肝组织匀浆氧化应激指标的变化：随着时间的延长，大鼠肝组织匀浆 TG、0FR、MDA及TXB：含量逐渐升高，SOD、ASOA、6一K—PGFl Q降低，与正 常对照组比较尸O．05或尸O．01 2 Kupffer细胞在大鼠酒精性肝病发病机理中的作用 kupffer细胞是肝内定居的巨噬细胞，由于其细胞表面存在多种受 体，可被多种配体和激活剂激活，通过产生反应氧、细胞因子和炎症介质 参与多种肝脏疾病的发病过程，为探讨其在酒精性肝病发病机理中的作 用，本实验应用DPAS染色和流氏细胞仪观察ALD模型大鼠肝组织Kupffer 细胞形态及数量变化，并与肝匀浆氧化应激指标进行相关分析，结果如下。 2．1肝组织DPAS染色：正常对照组肝组织汇管区可见少量DPAS阳性细胞， 4周模型大鼠肝小叶I带DPAS阳性细胞增多，随着造模时间的延长阳性 表达明显增强，16周模型大鼠整个肝小叶内窦周散在分布DPAS阳性细胞， 胞浆丰富，体积肥大。 2．2流式细胞术大鼠肝组织kupffer细胞定量分析：随着造模时间的延长 肝组织kupffer细胞量逐渐增加，正常对照组、4周、8周、12周和16 周模型大鼠肝组织荧光指数分别为：1．05±0．04、1．11±0．07、1．19± O．08、1．42±O．16和1．44±1．06；标记率(％)分别为2．78±1．04、3．75 ±O．76、4．54±0．93、5．80±O．96和8．19±1．20 2．3肝组织kupffer细胞标记率与肝匀浆氧化应激指标间相关性：相关 分析表明，肝组织kupffer细胞标记率与肝匀浆0FR和MDA呈正相关， 相关系数分别为O．76和0．74，尸值均小于O．01；与ASOA—SOD呈负相 中文摘要关，相关系数分别为一0．72和一0．66，尸值均小于0．0l。 中文摘要 关，相关系数分别为一0．72和一0．66，尸值均小于0．0l。 3 NADPH氧化酶和环氧合酶一2在酒精性肝病大鼠肝组织的表达及意义 为研究NADPH氧化酶和COX一2在酒精性肝病肝组织中的表达状况，探 讨二者在ALD发病机理中的作用，应用RT—PCR和免疫组化方法观察肝组 织其mRNA和蛋白表达，结果如下。 3．1肝组织COX一2免疫组化：正常对照组肝组织未见COX一2阳性表达，随 着造模时间的延长阳性表达明显增强，主要表达于细胞浆内。 3．2肝组织NADPH氧化酶的亚单位P47曲“和COX一2 mRNA表达：随着造模 时间的延长肝组织二者表达量逐渐增加，正常对照组、4周、8周、12周 和16周模型大鼠肝组织P47曲“mRNA表达量分别为0．20±0．06，0．23± O．08，O．33±0．06，0．45±0．14，和O．62±0．16：COX一2mRNA表达量分别 为O．20±0．05、0．26±0．05、O．34±0．07、0．38±0．08和0．68±O．16。 3．3肝组织P47曲“mRNA和COX一2mRNA相对表达量与肝匀浆生化指标间相 关性：相关分析表明，肝组织P47曲“和COX一2 mRNA相对表达量与肝匀浆 0FR、MDA、．TG、和TXB：呈正相关， 尸均0．01；与ASOA、SOD呈负相关， 尸均O．01。 4酒精性肝病大鼠肝组织Toll样受体4及血清细胞因子的变化 为了研究酒精性肝病发病过程中肝组织Toll样受体4(TLR 4)和血清 细胞因子的变化，动态观察ALD大鼠血清IL一1 B、IL一6、IL一10及TNF— Q含量，应用RT—PCR方法观察肝组织T011样受体4 mRNA表达，结合肝 组织病理改变探讨TLR 4和细胞因子网络在酒精性肝病发病机理中的作 用。结果如下。 4．1大鼠血清IL一1 B、工L一6、IL一10、TNF—Q水平变化：随着造模时间的 延长，血清IL一1 B、IL一6、IL一10、TNF—Q含量逐渐升高，IL一10于4周、 8周时明显升高而于12周后逐渐下降。 4．2肝组织TL