当归种子蛋白质提取方法及SDS-PAGE技术体系研究Δ-中国药房.PDFVIP

当归种子蛋白质提取方法及SDS技术体系研究Δ ＊ # 张延红 ，高素芳，王 燕，李金田，杜 弢（甘肃中医药大学药学院，兰州 730000） 中图分类号 R284.2 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2017）13-1751-04 DOI 10.6039/j.issn. 1001-0408.2017.13.07 摘 要 目的：建立适用于当归种子蛋白质提取及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）的技术体系，为当归种子蛋 白质研究和品种纯度检测提供技术支撑。方法：以蛋白质含量和电泳条带数量等为指标，采用浓缩胶法、盐溶蛋白法、电极缓冲液 法、二巯基苏糖醇（DTT ）法、尿素法、巯基乙醇法、三羟甲基氨基甲烷（Tris ）法、丙酮沉淀法等8种方法提取当归种子蛋白质，筛选 最优提取方法；再以最优提取方法为基础，考察不同料液比、样品稀释倍数（上样量）和分离胶浓度对当归种子蛋白质提取及 SDS效果的影响。结果：8种提取方法中以巯基乙醇法提取蛋白质的含量较高（29.931mg/g ），且电泳条带数目多、泳道背景 清晰；当以巯基乙醇法为最优提取方法时，料液比为1∶10、上样量为5倍、分离胶浓度为15％条件下电泳效果最好，共得到18条条 带。结论：建立的蛋白质提取方法和SDS技术体系适用于当归种子纯度的检测。 关键词 当归；种子；蛋白质提取；SDS Study on the Protein Extraction Method in Angelicae sinensis Seed and Its SDSTechnical System ZHANG Yanhong ，GAO Sufang ，WANG Yan ，LI Jintian ，DU Tao （School of Pharmacy ，Gansu University of Chi- nese Medicine ，Lanzhou 730000，China ） ABSTRACT OBJECTIVE ：To establish the technical system that is suitable for protein extracting in Angelicae sinensis seed and sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis （SDS），and provide technical support for detecting the protein quality and variety purity. METHODS ：Using protein content and number of electrophoretic bands as indexes ，8 methods ，includ- ing voncentrated gel method ，salt-soluble protein method ，electrode buffer method ，dimercaptosyl alcohol （DTT ）method ，urea method ，mercaptoethanol method ，trimethylolaminomethane （Tris ）method ，and acetone precipitation method ，were conducted to extract the protein in A. sinensis seed and screen the optimal extraction method. Then based on optimal extraction method ，effects of different materials-lipid ratios ，sample dilution times （sample volume）and separate gel concentration on SDSwere investi- gated. RESULTS ：Mercaptoethanol method extracted the highest protein contents （29.931 mg/g ），with many electrophoretic bands and clear bac