毒理学-小鼠骨髓细胞微核试验.pptVIP

小鼠骨髓细胞微核试验 卫生毒理教研室 目 的 微核试验是一种体内试验方法，用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的化学毒物的快速检测方法。 通过本次实验，学习和掌握小鼠骨髓多染红细胞（PCE）微核测定方法。 原 理 形成原因：细胞内染色体断裂或纺锤丝受损在细胞分裂后期滞留在细胞核外的遗传物质，大小相当于细胞直径的1/20-1/5，呈圆形或杏仁状，在细胞间期可出现一个或多个，其染色与细胞核一致，故称为微核。 微核可以出现在多种细胞中，但在有核细胞中较难与正常核的分叶及核突出物相区别。由于红细胞在成熟之前最后一次分裂后数小时可将主核排出，仍保留微核于PCE中，因此通常计数PCE中的微核。骨髓中PCE充足，微核容易辨认，自发率低，因此首选。 原 理 器材和试剂 手术刀、手术剪、无齿镊、干净纱布、晾片板、电吹风机、玻璃蜡笔、玻璃染色缸、2ml 注射器及针头、载玻片及推片、定时钟、带油镜头显微镜、细胞计数器。小牛血清、甲醇、吉姆萨染液 染毒→取材→制片→阅片 实验过程 学生操作部分 染毒方案 每组10只，3-5个剂量组和阴、阳对照 体重18-20g， 7-12周龄， 雌雄各半 原则上采用与人体接触化学物的途径 1、连续4次染毒，第5天取样（常用） 2、连续2天染毒，末次染毒后6h取样 处死：脊髓离断处死； 取股骨：从背部取，防止出血； 冲骨髓：小牛血清适量 推片：45度角； 晾干：吹风机吹干，一定要干； 固定：甲醇固定5min, 需要晾干； 染色：Gimesa染液染色（10~15min） 冲洗：蒸馏水冲洗，晾干 阅片:每只动物计数1000个PCE细胞，计算微核率。 操 作 步 骤 Gimesa应用液 Gimesa储备液: 1份 pH6.8的磷酸盐缓冲液：9份 甲液 乙液 各一半 先在低倍镜下进行观察，选择分布均匀，染色较好的区域，再在油镜下观察计数， PCE 细胞呈灰蓝色，细胞中含有的微核多数呈圆形，边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色，一个细胞内可出现一个或多个微核，如图所示。 结果分析与评价