毒理学第七章外源化学物致突变作用-2.pptVIP

(三)染色体畸变分析 (chromosome aberration analysis) 观察染色体形态结构和数目改变称为染色体畸变分析，又称细胞遗传学试验。 它将观察细胞停留在细胞分裂中期相，用显微镜检查染色体畸变和染色体分离异常。 哺乳动物 受试物 染色体畸变 骨髓/睾丸染色体 人外周血淋巴细胞或 培养的哺乳动物细胞 受试物 染色体畸变 哺乳动物试验： 小鼠骨髓细胞染色体畸变试验 小鼠睾丸细胞染色体畸变试验 体外试验： 染色体畸变试验 可观察到裂隙、断裂、断片、无着丝点环、染色体环、双或多着丝点染色体、射体和染色体粉碎。 正常大鼠骨髓染色体 （四）姐妹染色单体交换试验 姐妹染色单体交换 （sister-chromatid exchange, SCE） 指染色体同源座位上DNA复制产物相互交换，其频率与DNA断裂和修复有关。 原理 (五)果蝇伴性隐性致死试验 果蝇伴性隐性致死试验（sex-linked recessive lethal test, SLRL）是利用隐性基因在伴性遗传中具有交叉遗传性，选择黑腹果蝇为实验动物。给予雄蝇受试物，如雄蝇的X染色体有突变，传给F1代雌蝇，再通过F1代雌蝇传给F2代雄蝇，使位于X染色体上的隐性基因在半合型雄蝇表现出来。 (六)显性致死试验 显性致死突变指哺乳动物生殖细胞染色体发生结构和数目变化，出现的受精卵在着床前死亡和胚胎早期死亡。 它是评价化学毒物对雄性动物的生殖细胞遗传毒性较好的方法之一，还可进一步确证体外试验或其他试验系统获得的阳性结果。 (七)程序外DNA合成试验 正常：S期的DNA合成 程序性DNA合成 DNA损伤：程序外DNA合成 (八)单细胞凝胶电泳试验 又称为彗星试验，此方法的优点为：检测低水平DNA损伤的敏感性高，对样品的细胞数要求少，适应性高，低花费，操作简便，使用的实验物质相对少，完成试验所需时间短。 （九） 观察方法的新进展 1. 转基因小鼠致突变检测系统 转基因动物是指基因组中整合以实验方法导入的稳定的外源DNA，并能遗传给后代的一类动物。 优点:可根据需要导入目的基因，即致突变的靶基因；敏感性高；结果可靠性高。 2. 微核自动化检测技术 流式细胞仪 图象分析系统 3. 荧光原位杂交技术 (fluorescence in situ hybridization, FISH) 它是原位杂交(in situ hybridization, ISH) 的一种。 ISH是一种在保持组织，细胞或染色体原有形态结构基础上，对其内部特殊核苷酸顺序进行检测及定位的分子生物学手段。 FISH是利用荧光探剂，将已标记或经特殊修饰的核酸探针与已固定的组织，细胞或染色体中DNA、RNA杂交，继而通过分析标记探针在被检对象中的显示状况而达到对特殊目标顺序进行检测、定位的目的。 它无论在体细胞或生殖细胞,分裂细胞或间期细胞，都能检出染色体断裂剂，非整倍体诱发剂，并可检出染色体精细结构改变。 对于环境中遗传毒性物质的检测，遗传病诊断，癌症早期诊断具有积极的意义。 三、致突变试验中的一些问题 （一）阴性和阳性对照的设立 阴性对照：空白对照，或者是溶剂对照。 阳性对照：已知能产生阳性反应的物质作对照。 哺乳动物细胞介导 S9 纯化酶和基因工程 （二）体外试验的活化系统 （三）致突变试验与致癌试验的关系 致突变试验仅可检测出遗传毒性致癌物与非遗传毒性非致癌物； 假阳性：遗传毒性非致癌物； 假阴性：非遗传毒性致癌物； 致突变试验是短期致癌物检测试验中的一大类，需与其他试验结合。 （四）试验结果在毒理学安全性评价中的作用 致突变试验的质量控制 设立阴性对照与阳性对照； 盲法观察； 资料的统计学差异； 试验结果的重现性。 阴性结果判定条件： （1）最高剂量应包括受试物溶解度许可或灌胃量许可的最大剂量。 （2）各剂量组的组间差距不应过大，以防漏检仅在非常狭窄范围内才有突变能力的某些化学毒物。 阳性结果应具有剂量—反应关系，即随剂量增加，致突变作用增加；和在一组或多组的观察值与阴性对照比较有显著性差异。 阳性结论，即表明受试物具有致突变性，而不同致突变试验的遗传学终点不同，其所表示的含义不一。 如基因突变是具有导致遗传性疾病的突变，DNA修复的实际后果尚不明确 阳性结果判定条件： 我国卫生部《食品安全性毒理学评价程序》(1994)对遗传毒 理学试验的要求： 根据受试物化学结构、理化性质以及对遗传物质作用终点的不同，并兼顾体外和体内试验以及体细胞和生殖细胞的原则，在Ames试验、小鼠骨髓微核试验或骨髓细胞染色体畸变试验、小鼠精子畸形试验和睾丸染色体畸变试验中选择四项，如其中一项试验