禽多杀性巴氏杆菌病病原分离鉴定与药敏试验.docxVIP

禽多杀性巴氏杆菌病病原分离鉴定与药敏 试验 【摘要】本文通过研究从梧州送检的疑似多杀性 巴氏杆菌病死鸡的肝脏中分离出了一株细菌，根据其培养特 性与典型的染色特征并结合生化试验鉴定为巴氏杆菌。 【关键词】巴氏杆菌；多杀性巴氏杆菌；病原；生化试 验；分离鉴定；药敏试验 1巴氏杆菌属概述 巴氏杆菌［1］属(Pasteurella)分类地位未定的1属， 为无芽胞，不运动，兼性厌氧，菌体两端常染色浓重的革兰 氏染色阴性小杆菌［2］,因1880年巴斯德氏首先自病鸡分离 到本属中的多杀巴氏杆菌而得名。［3］该属已确定的种有多 杀巴氏杆菌、嗜肺巴氏杆菌、溶血巴氏杆菌、尿巴氏杆菌和 鸭疫巴氏杆菌等。属中的多杀巴氏杆菌危害畜、禽最严重， 主要引起动物发生出血性败血症。从发病动物体液或组织中 培养分离到的菌落基本有两型：一为在过45°折光，低倍显 微镜下，呈现鲜明的蓝绿色而带金光，边缘有狭窄的红黄色 带的Fg菌落型，相当于血清型乙型；另一为在45°折光下, 低倍显微镜下，菌落呈现橘红色、边缘稍带狭窄的黄绿光的 FO菌落型，相当于血清型甲型［4］。在中国，牛、猪、驴和 马的多杀巴氏杆菌病绝大多数为Fg型菌所致，家禽流行性 巴氏杆菌病都是F0型菌所致［5］。多杀巴氏杆菌菌体抗原有 12个型，荚膜抗原有5个型，前者以阿拉伯数字表示，后者 以英文大写字母表示，如1： A, 2； A, 1： B等，已知组成 的菌型有16个。本菌血清型与宿主的分布有一定关系，其 细胞壁含有明显的内毒素活性，但未发现外毒素。本菌可引 ■ ■■起家禽霍乱的暴发性流行，牛的出血性败血病、原发性或继 发性肺炎等，国外免疫用的菌苗以加不同佐剂的灭活菌为 主，也使用禽霍乱弱毒活菌，中国已于1959年使用弱毒活 苗[6] o ■ ■■ 2多杀性巴氏杆菌及其危害 多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida, Pro)是 一种重要的病原菌，对多种动物和人均有致病性，可以导致 猪肺疫、禽霍乱、牛羊兔出血性败血症等危害严重的畜禽传 染病。多杀性巴氏杆菌正常存在于多种健康动物的肺和咽喉 部黏膜，当动物处于应激状态、机体抵抗力低下时，细菌侵 入体内，大量繁殖并致病，发生内源性传染。此菌类在同种 或不同种动物间可相互传染，蝉和蚤被认为是自体传播的媒 介昆虫［7］。本病的广泛性及其传染性，使得它在养禽业中 造成的危害仅次于新城疫。 3生化试验原理 各种微生物细胞所含的酶系统不完全相同，这决定其在 代谢类型上存在差异，对糖、蛋白质等营养物质的分解能力 也不一致，因而其代谢产物也有差异，即使针对同一营养物 质的代谢途径和代谢产物也会不同。因此通过生化反应方 法，根据微生物对糖，蛋白质等基质的利用情况及其不同的 代谢产物的生化特性可以作为鉴定细菌的重要依据之一。 3. 1糖类分解试验 细菌分解糖的能力与该菌是否含有分解某种糖的酶密 切相关，是受遗传基因所决定的，是细菌的重要表型特征， 有助于鉴定细菌，含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解则 产酸或产酸产气，使培养基颜色变化，从而判断细菌是否分 解某种糖或其他碳水化合物。细菌发酵糖类可以产生各种酸 （乳酸、乙酸等）和气体（甲烷、氢气、二氧化碳），酸和 气的产生与否可根据培养后试管中指示剂的颜色变化和小 套管中有无气泡判定，指示剂酸性复红在碱性环境呈黄色， 酸性环境呈红色。 3.2石蕊牛乳试验 石蕊是一种PH指示剂，当pH值降至4. 5时酸性显红色, PH值接近中性时，未接种的培养基为紫蓝色故称紫乳。石蕊 也是一种氧化还原剂，可以还原为白色，所以石蕊牛乳（紫 乳）是用来测定被检细菌几种代谢性质的一种鉴别培养基。 将被检细菌接种于紫乳，置371温箱培养，观察结果。若细 菌分解乳糖产酸，指示剂变色（石蕊为红色，漠甲酚紫为黄 色）。若产酸产气，使牛乳酸凝，气体使凝块中有裂隙；若 为紫色，表示乳糖未分解；若为蓝色表示乳糖虽未发酵，但 细菌分解培养基中所出现的氮源物质而产碱所致；若指示剂 还原则为无色，常出现在酸凝块出现后。 4研究目的和意义 禽巴氏杆菌病（禽霍乱）一年四季都有散发，以春秋节 较多，在我国各地均有发生，是目前危害养禽业的重要细菌 性传染病之一。如何正确诊断以及合理用药治疗禽巴氏杆菌 病是目前广大学者十分关注的问题。在广西梧州送检的一批 6月龄病鸡中出现呼吸急促、鼻和口中流出混有泡沫的黏液、 剧烈腹泻、粪便灰黄色或灰绿色等症状，发病鸡群产蛋量下 降30%左右，剖检病鸡可见鼻腔内有黏液，胸腔、腹腔、气 囊上有干枯样渗出物，肝肿大、质脆、呈棕黄色、表面有许 多小米粒大小的灰白色坏死点，心冠脂肪有很多出血点，心 包内积有淡黄色液体，我们怀疑鸡群患有鸡霍乱，但用增效 磺胺治疗效果不理想，于是我们进行了病原的分离鉴定，涂 片镜检发现典型两极着色的巴氏杆菌，