磺酸基修饰SBA―15在MALDI―TOF―MS氨基酸研究中应用.docxVIP

磺酸基修饰SBA-15在MALDI-TOF-MS氨 基酸研究中应用 摘要：磺酸基化学修饰的介孔材料SBA-15被用做 无机基质，用于MALDI-TOF-MS分析几种人体必需氨基酸。 在优化的分析条件下，磺酸基修饰的SBA-15对氨基酸的检 出限达到pmol级别。混合氨基酸样品被成功检测。 关键词:SBA-15； MALDI-TOF-MS；必需氨基酸 基质辅助激光解吸电离技术MALDI,是21世纪80年代 发展起来的一种应用于质谱分析的电离化技术。它被成功应 用于生物大分子的分析领域。然而由于使用了有机基质，在 小分子量区域产生了碎片干扰。为了解决这一问题，质谱学 界做了大量的尝试和研究［1］。近年来出现了一些将表面化 学修饰的介孔材料SBA-15用于MALDI无机基质的报道［2］。 氨基酸是重要的生物小分子，其中8种必需氨基酸，是 一些疾病的标志物，对它们的分析检测具有很大的应用价值 ［3］。MALDI-TOF-MS分析具有简单、快速的优点。本研究拟 采用磺酸基修饰的SBA-15,用作无机基质，分析几种必须氨 基酸。 实验部分 1仪器与试剂 MALDI-TOF-MS基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪 （岛津公司）；三氟乙酸，3-蔬基丙基三甲氧基硅烷，溶剂, 氨基酸（分析纯，希恩思公司）；SBA-15 （南京先锋纳米科 技公司）。 2 SBA-15的化学修饰 SBA-15,在马弗炉中550°C下焙烧2h,接着与3倍质量 的MPTMS,在精制甲苯中回流48h。过滤，用乙醇索氏提取 24ho真空干燥24h,得到SBA-15-SHo称量lOOmg的 SBA-15-SH,加入10mL质量比为1/3/10的双氧水、甲醇和 水溶液中，室温下搅拌12h，过滤。滤饼加入到5mL 0. 5mol/L 的H2S04溶液中，室温下搅拌12h,过滤。用乙醇和水洗涤, 抽滤，得到SBA-15-S03H[3]o真空干燥12h,取出，置于干 燥器中保存。 用FT-IR进行定性分析。FT-IR结果表明，在嫁接硫基 后，在2850?2980cm-l范围内出现其伸缩振动峰。同时， 在2580cm-l处出现一个弱的S-H吸收峰。磺化后，2580cm-1 处的吸收峰消失。 3分析条件的优化 3. 1基质，样品，与酸比例的优化 将苯丙氨酸，绷氨酸，TFA配制成3*10-4mol/L的甲醇 溶液。将SBA-15-S03H配制成0. 06、0. 6、6mg/mL的甲醇分 散液。样品/酸/基质各取5uL混合，震荡。从中移取luL, 点样。自然干燥后，进入MADLI-TOF-MS进行分析。谱条件 为：正离子反射模式，能量120,100个信号累加。在10-4mol/L 浓度下，绷氨酸与苯丙氨酸都能够很好的被检测到。我们考 察了在样品与酸的浓度一定时，基质的量对信号强度的影 响，实验结果如下：Phe,磺化SBA-15的P =0. 02mg/mL,信 号强度为 5. 5K； P =0. 2mg/mL,强度为 11K； p =2mg/mL,强 度为 11. 5KO Vai, P=0.02mg/mL,强度为 3K； p =0. 2mg/mL, 强度为6K； P =2mg/mL,强度为6. 5KO可见，样品一定， SBA-15-SO3H的量的增加使信号强度增加。但当基质浓度达 到0.加g/mL以后，增加的较不明显，考虑到随着SBA-15-SO3H 的量的增加，可能会带来少量的碎片的干扰。我们最终选择 比例为10-4mol氨基酸/0. 2g磺基化SBA-15O 此外，我们考察了酸的浓度对信号强度的影响，经过类 似的信号强度对比试验，我们最终选择了 10-3niol/L为优化 的条件，即三氟乙酸的浓度为样品的10倍。 3.2溶剂的优化 MALDI-T0F-MS分析存在一个问题，就是重现性较差，而 这与溶剂的分散能力有关。所以我们考察了三种常用的溶 剂，甲醇，乙睛，水。将苯丙氨酸，颔氨酸分别配制成 3*10-4mol/L的甲醇，乙膳，水溶液。在优化比例下进行分 析，质谱条件同上。每个样品要点样三次，每个样品点分析 两次。分析后计算RSD值/%如下：Phe/甲醇，29； Phe/乙睛, 27； Phe/水，21； Vai/甲醇，31； Vai/乙睛，26； Vai/水， 18o水中的重现性最好，这可能是由于磺化的SBA-15在水 中的分散能力提高造成的。 4检出限的研究 将苯丙氨酸，纟颉氨酸，分别配制成3*10-4、3*10-5、 3*10-6 . 3*10-7mol/L的水溶液。优化条件下，进入 MADLI-TOF-MS进行分析。当样品浓度为10-6mol/L时，以 SBA-15-SO3H 为基质能够顺利检出，[Val+Na] + . [Phe+H] + 的S/N分别为32, 53o 图1 p