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金黄色葡萄球菌DNA提取方法的探讨
冯秀梅中华医学研究杂志2004年12月第4卷第12期
金黄色葡萄球菌DNA一般采用经典溶菌酶、酚、氯仿提取法，但获得的DNA量不多，参照文献［1］的方法，经过我们多次的实验，发现以制备DNA的方法可取。
1材料和方法
1.1菌株来源本实验室分离到的细菌，经形态学、染色镜检及血浆凝固酶实验等已鉴定为金黄色葡萄球菌。
1.2试剂［2］20mmol/LTris-HClpH8.0缓冲液，溶菌酶（20g/L），SDS，蛋白酶K，丙酮，已配好的缓冲液:10mmol/LTris-HCLpH7.4，1mmol/LEDTApH8.0，裂解液:含100g/LSDS的缓冲液，饱和酚，氯仿，5mmol/LNaCl。
1.3仪器LBK4050分光光度计
1.4方法将已分离出来的金黄色葡萄球菌接种于血平板上培养24h后，用接种环从血平板上取一菌落，放Tris-HCL缓冲液250μl中混匀，计数，取含106/菌的菌液，3500r/min离心8min，弃上清，加500μl丙酮，混匀，水浴5min。然后3500r/min离心8min，弃上清加溶菌酶250μl，37℃放2h，再加入SDS使其浓度为10g/L，放置5min，煮沸5min，加入缓冲液150μl，已配好的NaCl5μl，饱和酚200μl，氯仿200μl，振荡混匀30s，10000r/min离心20min，取上清350μl，加无水乙醇1ml，置-20℃半小时，再离心10000r/min离心5min，弃上清，沉淀用40μl缓冲液溶解，用此方法提取16份标本，然后用分光光度计检测DNA含量，结果见表1。
表116份标本DNA含量略
2结果
由上表可得出DNA的平均含量为118.8μg/106菌。
3讨论
金黄色葡萄球菌的主要成分是肽聚糖，它的结构致密、坚硬，细胞壁相对较厚，所以要提取DNA，必须找到较容易溶解菌壁的方法，用丙酮悬浮细菌沉淀破坏细菌菌壁的脂质结构，再用溶菌酶溶壁，效果要比以往方法好得多，所获得的DNA含量高、纯度高。
参考文献
1潘世扬.金黄色葡萄球菌随机扩增多态性DNA分型及其应用.临床检验杂志，2002，3（20）:81.
2王庸晋.现代临床检验学.北京:人民军医出版社，2002，10，147.
作者单位:132002吉林省吉林造纸厂医院检验科
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