阻止切片的霉菌染色方法比较.doc

PAGE PAGE 1 阻止切片的霉菌染色方法比较 谈勤明胡有长中华医药杂志2004年12月第4卷第12期 　　因病理组织切片常规苏木紫伊红染色（下简称常规染色）尚能辨认霉菌，所以组织切片的霉菌染色体未得到应有的重视。现将笔者过去霉菌感染的组织切片，进行了6种霉菌染色比较，结果如下。 　　1材料与方法 　　从过去霉菌感染或可疑霉菌感染的19例尸检和5例活检标本中（主要是念珠菌\曲霉菌及毛霉菌感染，也有个别的放线菌及隐球菌感染），选出有关的组织蜡块，重作厚4μm切片，脱蜡后分别进行革兰染色，PAS染色，Grialey氏醛品红-PAS法染色（1.2.3），Grocott-Gomori二氏乌洛托品硝酸银法染色（4.5），Mallory氏纤维蛋白改良法（2）及常规染色。 　　PAS染色胳改用0.2%淡绿代替苏木紫作对比染色。Grialey氏醛品红-PAS染色法，用1%高碘酸氧化30min代替5%铬酸氧化。 　Grocott-Gomori二氏乌托品硝酸银染色法，亦用1%高碘酸氧化30min代替5%铬酸氧化，并以0.2%淡绿代替苏木紫作对比染色。 　　2结果 　　革兰染色切片内，念珠菌为蓝色（革兰阳性），曲霉菌和毛霉菌则为红色（革兰阴性），但毛霉菌着色较浅，结构不清。因系中性红对比染色，细胞核亦染为红色，与霉菌孢子鉴别有困难.放线菌及隐球菌均未着色。 　　PAS法染色，以淡绿作对比染色较苏木紫为佳，霉菌均显红-紫色菌丛中隔及孢子均明显可见。 　　Grialey氏醛品红-PAS法染色，霉菌丝及孢子均染成程度不同的红-紫红色。但背景亦为浅紫色，对比不鲜明，但霉菌着色深，镜下观察仍较常规紫色者为优。 　Grocott-Gomori二氏乌洛托品硝酸银染色法，霉菌均染成黑色，当染色深浅适当时，切片中菌丝的壁，孢子的包膜及菌丝中隔均呈深黑色，菌丝内部显暗褐色，结构清楚，改用淡绿对比染色，较苏木紫伊红染色为鲜明，适合观察和摄影。 　Mallory氏纤维蛋白改良法，霉菌染为蓝-深紫色，背景是苏木紫及伊红染色，因此近似常规染色，只是霉菌较深。 　在常规染色中，霉菌的孢子及菌丝一般均染成浅蓝色，较细胞核为浅，因为是蓝色，有时孢子难以与细胞核或已破碎的细胞核鉴别，而菌丝也长不能和已挤压成丝状的细胞核鉴别。所以，常规染色和其他霉菌染色比较，发现常规染色存在以下问题:（1）每张切片中所见到霉菌的数量远不及其他霉菌染色多;（2）在常规染色中，有3例未找到霉菌的切片，做了霉菌染色即能证实有霉菌存在，如1例皮肤烧伤的病例，临床怀疑有霉菌感染，常规染色不能找到霉菌，而霉菌染色证实有毛霉菌感染。1例患者用了大量的激素及抗生素后死亡，肾脏有一脓肿，内有多核巨细胞，不象化脓性细菌感染。曾疑为霉菌所致，常规染色未能找到霉菌，经霉菌染色后，证实脓肿内有念珠菌。存在另1例致死性中线肉芽肿患者，用了激素等治疗后，肺内有念珠菌\曲霉菌及毛霉菌混合感染，死于十二指肠降部穿孔，穿孔部有坏死及炎症，疑为霉菌所致，但切片曾多处会诊，均因找不到霉菌而不能肯定.这次做霉菌染色，在穿孔边缘及坏死区有少数念珠菌，肯定是霉菌感染所致的穿孔;（3）常规染色能见到霉菌数量少，且易与其他组织结构混淆，造成分类错误或遗漏，经霉菌染色纠正分类错误或遗漏的有7例，多数是毛霉菌与念珠菌混淆。有1例肺内常规染色仅见到多数孢子，未见菌丝，当时不能分类，只能诊断酵母菌类霉菌感染，经霉菌染色后，发现有菌丝存在，只不过量少而已，而改正为念珠菌感染。 　　1年后，重新观察切片时，常规染色及Grocott-Gomori氏洛托品硝酸银染色均无褪色，其他染色均有不同程度的褪色。淡绿对比染色几乎完全褪色。 　　作者单位:330006江西医学院形态中心教研室