橄榄总黄酮的提取与其对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用的分析.pdfVIP

橄榄总黄酮的提取及其对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用的研究 摘 ‘要 目的以橄榄总黄酮(按芦丁折算)提取物为有效成分，筛选出最佳提取条件， 用大孔树脂法对橄榄总黄酮进行纯化，确定最佳纯化条件。采用大脑中动 cerebral 脉栓塞(middle artery 对局灶性脑缺血再灌注损伤(CIRI)的保护作用，并探讨其机制。 方法(1)以橄榄总黄酮(按芦丁折算)提取物为有效成分，采用可见分光光度 法，对TFCO的含量进行控制，采用乙醇作为溶剂对不同浓度、不同用量、 不同提取时间3个因素按正交实验法设计优选出最佳提取工艺。用大孔树 脂法对TFCO进行纯化，筛选了大孔树脂的种类，综合考察了树脂的吸附率， 解析率，上样流速，上样液pH，洗脱剂浓度，洗脱体积，流速等各项指标。 (2)线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞2h／再灌注24h模型，于再灌注前4 天灌胃给予橄榄总黄酮30、60mg．kg一。神经病学评分观察神经功能缺失 症状；TTC染色法观察脑梗死体积：AutoCAD图像分析软件计算脑水肿程度； 光镜观察脑组织形态学变化；免疫组化法检测脑组织iNOS、TNF-Q表达； 生化法检测脑组织中MPO、GSH活性及T_AoC含量。 结果(1)超声提取的最佳工艺是：取橄榄适量，加4倍量95％乙醇，超声提 取6D分钟；(2)纯化的最佳工艺是：使用DIOI型大孔树脂，配制pH4。5 60％ 吸附液以2BV／h上柱，至泄漏。用3BV纯水以2BV／h洗柱后，再用3BV 乙醇洗脱，流速为IBV／h，将洗脱液减压浓缩，干燥得橄榄总黄酮，纯度 为90．1％。 (2)脑缺血2h／再灌注24h后，神经功能缺失，脑组织出现白色梗死灶，脑水 肿明显，形态学呈病理改变，脑组织iNOS、TNF—Q蛋白表达增强，MPO活 性增高，GSH活性降低，T—Aoc含量降低； (3)TFCO30、60 mg．kg叫均能改善神经功能缺失症状，有效减小脑梗死灶， 减轻脑水肿，抑制脑组织iNOS蛋白表达，增高脑组织GSH活性，提高T—AOC 含量，还可缓解MPO升高，并能减轻脑组织病理变化，抑制脑组织TNF—a 蛋白表达。 结论(1)大孔吸附树脂纯化橄榄总黄酮，使其纯度达到90％以上；(2)再灌注 护作用，可能与减少iNOS和TN卜Q蛋白表达、抗炎、抗脂质过氧化有关。 关键词橄榄总黄酮超声提取大孔树脂大脑中动脉栓塞再灌注损伤 脂质过氧化 4 from Studiesofextractionoftotalflavones process oliveandits effects Chinese against protective · -· - - ^ l● ● ● ● 。 cerebral inrats ischemla／repertUdlOnin]ury ABSTRACT OBJECTIVETodetermineoftotal as theextractionis flavone(r