《中药鉴定学实验技术》试题(1).doc

2015级中药学硕士研究生《中药鉴定学实验技术》试题 学号 姓名 仇守蓓 得分 一、简述石蜡制片方法的基本步骤及注意事项。 答：（一）基本步骤： 石蜡切片制作基本技术： 石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。 1、取材 应根据要求选取材料来源及部位。采下的标本要注意保湿，冲洗干净后截取大小合适的样品迅速投入固定液中。 2、固定 卡诺氏固定液（无水乙醇：冰醋酸=3：1）固定24h，70%酒精保存。固定液的用量通常为材料块的20倍左右，固定时间则根据材料块的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定，可以从1小时至数天，通常为数小时至24小时。 3、洗涤与脱水 从50％开始→70％→85％→95％→无水乙醇（30min）（此步骤需两遍），每次时间为1～2h；如不能及时进行各级脱水，材料可以放在70％酒精中保存。脱水乙醇的用量为材料体积的3~5倍。 无水乙醇中要加入不含结晶水的CaCl2 ；用95%的乙醇配制各级脱水乙醇（原浓度95%,要配浓度y%,则取yml95%乙醇加上95-y=？ml蒸馏水即可）。 4、透明 经1/2无水乙醇+1/2二甲苯（氯仿）至纯二甲苯（氯仿）两级透明，每级停留2h。在1/2无水乙醇+1/2二甲苯时加入少量番红干粉。 5、浸蜡 在浸入有植物材料的透明剂中投入切成小块的低熔点石蜡，加入石蜡的量溶入透明剂的用石蜡溶液=透明剂体积为原则。用浮石蜡（石蜡放入容器中，水浴熔融，取出石蜡，冷却时不断用玻璃棒搅拌，空气进入，冷却后即为浮石蜡）。加蜡后放有材料的有盖容器放入35℃的温箱中6h或更长时间。之后调高温度至56℃，打开盖子让透明剂蒸发，2h后将石蜡溶液倾去。将植物材料移入高熔点的熔融纯石蜡小烧杯中，2~4h再换一次熔融纯石蜡，2~4h即可进行包埋。 6、包埋、切片和粘片 （1）折包埋纸盒； （2）材料包埋：熔融的石蜡到入纸盒中，用在酒精灯上烧热的镊子或解剖针将材料排好（快速，避免石蜡结晶），然后将包埋纸盒放入冷水中冷却凝固。 （3）修蜡：每块拉一个材料，双面刀片切开。 （4）粘蜡快：2*2*2.5~3cm的长方形木块，长轴一端刻出网格；木块具网格一端浸入已溶化的废石蜡中，蜡块修成下宽上窄的台体，用烧热的解剖针一面贴蜡块的宽面，一面贴木块的蜡面，粘贴后小蜡块四周用烧热的解剖针加固，使之不留缝隙。切面要与刀口平行。 （5）切片：毛笔托接 （6）粘片：干净载玻片→滴蒸馏水（不用明胶就可以）→用解剖针或刀将切片安放在液面上→放于温台上→调整切片→吸水纸吸去多余水分→温台上烤干后置于30度温箱中24h。 洗载盖玻片方法：洗液（重铬酸钾20g+水10ml+浓硫酸100ml）浸泡24h→自来水冲洗→蒸馏水洗→75%中浸泡备用（洗液可多次利用） 将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。 操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安全。 7、切片脱蜡 放入纯二甲苯的有槽染色缸内5~10min→1/2无水乙醇+1/2二甲苯的染色缸内5~10min。(看脱蜡情况变化时间) 8、染色—脱水—透明 脱蜡玻片转入无水乙醇中→95%→85→70→50→30→蒸馏水→4%铁帆(10min )→0.5%苏木精(30min)→蒸馏水→50→1%番红→50→70→85→95→无水乙醇→无水乙醇→二甲苯→二甲苯（其余每步骤5min左右，苏木精要提前一个月配置，可重复利用）注意不同材料要选不同的染色剂 9、封片 切片置于实验台上→滴已稀释的中性树胶于切片的中央（稍过量）→该盖玻片（用酒精灯稍烤一下）→30度温台上烘烤2~3d→多余树胶刮去→二甲苯擦干净→标签 使用中性胶前要用二甲苯稀释→稀释时用玻璃棒轻轻、缓慢搅拌以避免空气进入。 （二）注意事项： 1、取材后马上固定，以保证植物细胞自然状态，而不至于在细胞死亡之前材料的形态和结构发生变化。 (1)取材料要新鲜.动作要迅速,以免挤压损坏组织;取病理材料时,应设置对照材料。　 (2)所取材料大小要适当:根和茎一般直径≤5mm,切取成5-10mm小段;叶片一般取过中脉处,切成2-5mm宽,5-8mm长.在切材料时,必须注意刀片与中轴成直角,两切面平行,否则制成的切片细胞是斜的. 雌,雄蕊一般不需分割。　　 (3)取材时间可根据切片要求有所区别.如:在进行植物发育的研究过程时,需要找到细胞分裂相,一般在晴天的早晨9:00-10:00时取材,此时植物细胞