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翻译后修饰蛋白质合成策略探究 【摘要】蛋白质翻译后的修饰过程对蛋白质的结构 及功能会产生很大的影响。近年来为了探索特定的修饰对蛋 白质结构和功能的影响，科研工作者进行了深入、广泛的研 究。现就近年来新发展起来含修饰位点的翻译后蛋白质的合 成策略进行综述。 【关键词】翻译后修饰蛋白质；合成策略；琥珀密码子 抑制；标记及后修饰；天然化学链接 【中图分类号】R19【文献标识码】B【文章编号】 1004-7484 (2013) 04—0156—01 1?前言 通过基因转录和翻译得到的蛋白质终产物远远多于应 有的实际数量，而造成这种现象的主要原因是蛋白质翻译后 的修饰过程。 蛋白翻译后的修饰影响着蛋白质的结构和理化性质，而 这些结构因素进一步决定了蛋白质的功能多样性、稳定性甚 至是靶向性。这些修饰可以是静态的亦可以是动态的，由于 生命体系等复杂性，在生命体中直接对这些修饰进行研究往 往是非常复杂的，因而通过化学生物学手段得到单一类型修 饰的翻译后蛋白类似物对于在人类基因组计划的基础上阐 明生命的奥秘具有重要意义。 目前，对于翻译后蛋白修饰的手段主要有以下几种：甲 基化、磷酸化、糖基化、泛素化、酰基化等［3］。虽然这些 过程中应用到的底物和化学合成方法有差别，但是在这些修 饰过程中所采用的策略和基本理念是基本相同的。这些策略 大都通过一些半合成的化学生物学手段来得到目标蛋白，本 文对这些基本理念和策略进行归纳总结。 直接利用琥珀密码子抑制（Amber Codon Suppression-ACS）将合成的氨基酸类似物引入蛋白质 通过三联密码系统，核糖体能够以信使RNA为模板，通 过其与携带有氨基酸的转运RNA的互补合成包括20种不同 氨基酸的多肽序列。在多数生命体中，都存在终止密码子， 正常情况下，翻译完成后，这些密码子会与释放因子结合从 而导致翻译的终结。但是，研究发现，一些特定的有机体并 没有严格的遵守这一规律，它们之中存在转运RNA/转运RNA 合酶对，因而在琥珀终止密码子存在的位置仍然能够引入氨 基酸。将基因突变与表达结合起来，在含有转运RNA/转运 RNA合酶对的细胞系中可以将非天然的氨基酸直接引入到蛋 白中的特定位点。 首先通过对转运RNA随机突变筛选的方法得到含有突变 基因的转运RNA,然后琥珀密码子可以对突变之后的转运RNA 进行特异性识别，由转运RNA合酶将特定的非天然氨基酸引 入到特定的位置中［2］。目前，关于这一领域的研究焦点主 要集中于宿主中释放因子与转运RNA/转运RNA合酶对的竞争 方面。这一方法的主要优点在于可以直接将目标氨基酸引入 蛋白质中，但是目前最多还是只能在蛋白质中引入一个氨基 酸，而且寻找筛选合适的突变转运RNA以及较为繁琐的基因 工程操作也限制了这种方法的进一步发展。 通过标签加后修饰(tag and modify)的方法进 行修饰 对翻译后修饰蛋白质进行合成的第二种方法即标记 加后修饰的方法，这种方法包括两个步骤：标签，以及修 饰［3］。首先，通过共转录的方式将一个小的化学修饰引入 到蛋白质的特定位点，在对蛋白质纯化之后，然后再通过选 择性的、生物正交性的化学反应对这一位点进行修饰。反应 的标签可以是天然的或者非天然的氨基酸，目前天然的氨基 酸主要是半胱氨酸，非天然的氨基酸中应用最多的是L-高丙 氨酸(L-Aha)以及一些磷酸盐类似物。此外，化学生物学 家还发展出了一系列的生物正交性反应来对引入的标签进 行修饰，目前其中代表性的反应主要有施陶丁格反应以及铜 催化的叠氮与烘的Huisgen缩合反应。这些反应因为 其生物兼容性，在化学生物学领域正在发挥着越来越重要的 作用。 利用天然化学链接(Native Chemical Ligation-NCL) 或者表达蛋白链接(Expressed Protein Ligation-EPL)的 策略 天然化学链接以及表达蛋白链接是指通过碳末端硫酯 与氮末端半胱氨酸残基的反应来实现多肽与蛋白片段缩合 的技术。两者的区别在于硫酯和半胱氨酸残基所处的位置正 好相反，天然化学链接的硫酯位于多肽上（半胱氨酸位于蛋 白质上），而表达蛋白链接的硫酯则位于蛋白片段上（半胱 氨酸位于多肽上）。这种策略也主要包括两个步骤：1?多肽 的合成；2?多肽与蛋白片段的缩合。首先需要合成含有修饰 氨基酸的多肽，然后这个多肽需要进一步与表达得到的目标 蛋白质余下的残基进行缩合来进一步得到修饰后的蛋白质。 由于多肽合成技术的限制，目前人工合成多肽的长度一般情 况下只能达到40-50个氨基酸，因而这种方法只能应用于蛋 白质C-末端或者N-末端的修饰。 总结 虽然在将合成的蛋白质应用于解释生命奥祕方面已经 有大量的实例，但是这些研究大都集中于一些特定的生物学 热点和模型蛋白，仍然有很多未知的领域有