海南省含羞草根瘤菌的多相分类分析-微生物学专业论文.docxVIP

I I 摘 要 摘 要 本研究采用 16S rDNA PCR-RFLP 分析、BOX-PCR 指纹图谱分析、SDS全细 胞蛋白电泳、16S rDNA 全序列分析等方法，对分离自我国海南省含羞草（Mimosa spp.） 的 104 株根瘤菌菌株进行了系统的多相分类研究。 16S rDNA PCR-RFLP 分析结果表明，所有供试菌株在 61%的相似水平上可聚为一 群，在 71%的相似水平上获得 3 群，分别与贪铜菌属（Cupriavidus）、伯克霍尔德菌属 （Burkholderia）及根瘤菌属（Rhizobium）的参比菌株聚在一起。 通过 BOX-PCR 指纹图谱分析、SDS全细胞蛋白电泳分析，104 株供试菌株 共得到 35 种不同的 BOX 指纹图谱及 61 种不同的 SDS全细胞蛋白图谱；两种图 谱类型完全一致的为同一个菌株类型，最终得到了 69 个不同的表型和遗传型菌株类型。 16S rDNA 全序列分析与 16S rDNA PCR-RFLP 分析的结果一致，表明贪铜菌属 （Cupriavidus）为海南省含羞草的优势共生菌群，归到该属的菌株占供试菌株总数的 87.5%；5 株菌株与含羞草伯克霍尔德菌（Burkholderia mimosarum）PAS44T 的系统发育 关系最近，其代表菌株 HBU08040 与该种的相似性高达 99%。 此外，8 株供试菌株归到根瘤菌属（Rhizobium），代表菌株 HBU08051 和 HBU08115 与该属内各已知种的 16S rDNA 全序列最高相似性为 96.8%，有待进一步进行 G+C mol% 测定以及 DNA-DNA 杂交等以确定该批菌株的最终分类地位。 根据 16S rDNA 全序列分析及菌株区分的结果，选取归于不同属、不同菌株类型的 11 株代表菌株进行结瘤试验及结瘤菌株的 SDS全细胞蛋白电泳验证，结果表明 除菌株 HBU08001 和 HBU08149 之外，其余 9 株菌株均可与含羞草成功结瘤，且蛋白图 谱比对结果表明根瘤的形成确系接种菌株所侵染而成，接种菌株与结瘤菌株 SDS全细胞蛋白图谱不一致的两株菌株与含羞草的结瘤能力有待进一步验证；在此基础上， 选取其中 5 株可成功结瘤的菌株进一步研究其对含羞草生长的影响，通过有效根瘤数和 地上部分干重的统计学分析，初步表明菌株对含羞草的生长均有明显的促进作用，贪铜 菌属（Cupriavidus）菌株较其他菌株对植株的生长促进作用更明显。 II II 摘 要 关键词 含羞草 根瘤菌 多相分类 系统发育 PAGE PAGE IV Abstract Abstract A total of 104 rhizobial isolates from 54 root nodules gathered from geographically separated populations of leguminous plant Mimosa spp. in Hainan Province were obtained. And they were analyzed by polyphasic taxonomy such as 16S rDNA PCR-RFLP, SDSof whole cell protein, BOX-PCR fingerprinting, the sequences analysis of 16S rRNA gene together with 6 reference strains. The results of 16S rDNA PCR-RFLP indicated that all the examined strains could group together at the similarity of 61%, and further three groups were obtained at 71%: the genera Cupriavidus、Burkholderia in β-Proteobacteria and the genus Rhizobium in α-Proteobacteria, and all the examined strains could group with the corresponding reference strains. The 104 isolates were divided into 35 BOX-PCR genotypes and 61 SDSphenotypes, respectively, derived from analysis of BOX-PCR fingerprinting and SDSof whole cel