冠心病蛋白质组学研究-外科学专业论文.docxVIP

摘要目的：冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary 摘要 目的：冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary artery disease，CAD，冠心病)是 最主要的心血管疾病之一，每年在全球约有8，140，000人死于冠心病，占到死亡总 人数的16．8％。有关冠心病的病因和发病机制，目前有多种假说，但确切的机制尚 未明确。文献中有不少关于冠心病分子生物学机制的研究成果，这些发现为理解冠 心病的发病机制提供了各种依据。利用全基因组关联研究(genome wide association study，GWAS)的方法，至少已经发现有100多处单核苷酸变异(single nucleotide variants，SNVs)与冠心病发病相关。与此同时，也出现了不少研究 血浆蛋白变化与某些可能与冠心病相关病理过程，如：炎症反应、血小板活化、凝 血功能等关系的研究。然而，参与冠心病发病的蛋白质，尤其是在那些需要接受冠 状动脉旁路移植术(coronary artery bypass grafting，CABG)的复杂冠脉病变 中的蛋白质，其变化趋势可能尤为复杂，目前也没有相关的研究。本研究的目的在 于借助同位素标记相对和绝对定量技术(Isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ)，将患有三支病变合并／不合并左主干病变、需要行CABG 术的患者的血浆与非冠心病患者进行比较，从而找出特殊表达的蛋白质组。 方法：从2013年4月22日至2015年9月24日，共有320名行冠脉造影检查的受 试者序贯入选本研究，并分为两组：CABG组(160人，冠心病，行CABG术)、Control 组(对照组160人)。CABG组的患者均为经冠脉造影证实存在三支病变合并／不合并 左主干病变者；Control组的160名患者则经冠脉造影检查排除了冠心病的可能。 入选者排除标准：二次心脏手术；神经系统疾病(如：脑血管事件(CVA))；严重 的肺部疾病(肺功能检查提示暂不宜手术者)；肾功能衰竭(术前测定肌酐、尿素 氮)；肝脏疾病(术前测定转氨酶)；活动性炎性疾病；术前有凝血性疾病；术前有 房颤病史；甲状腺功能异常。在进行CABG手术前或造影术中，使用EDTA管收集血 液标本2ml。将收集到的血样尽快用3，500rpm离心15min，将上层血浆小心分离至 冻存管中，标记编号，并放置于一80℃的低温冰箱内。在两组中分别选出随机选出 20例男性、20例女性的血浆标本，共4组80例标本。每例标本取lOOul，按组混 合为2ml的样本，4份样本分别标记为：CABGM(CABG组，男性)，CABGF(CABG组， 女性)，CM(control组，男性)及CF(control group，女性)，用于iTRAQ检测。 使用Mascot搜索引擎完成蛋白检索、定量分析。各组蛋白差异蛋白倍数大于1．2 且p0．05时，确定为差异蛋白。利用CABG组(n=120，男性=61)和control组(n=120， 男性=60)的血浆标本，选取差异蛋白中的6种进行酶联免疫吸附测定(human 万方数据 enzyme一1inked enzyme一1inked immunosorbent assay，ELISA)验证。 结果：iTRAQ测定共检测出544种蛋白，其中有35种蛋白上调表达，41种蛋白下 调表达(CABG VS．control，pO．05)。选取的6种蛋白质中，凝血因子XlII B链 (coagulation factor XlII B chain，F13B)、血小板因子4(platelet factor 4， PF4)及分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled—related protein 1，sFRPl) 上调表达，维生素D结合蛋白(vitamin D-binding protein，DBP)、甘油醛一3一磷 酸脱氢酶(glyceraldehyde一3一phosphate dehydrogenase，G3PDH)及备解素 (properdin，CFP)下调表达(仄0．05)。在ELISA检测中，CFP、DBP、PF4及sFRPl 的血浆水平明显上调(CABG VS．control，pO．05)。其中DBP、PF4和sFRPl均与 冠心病、心肌梗死病史分别呈正相关关系(仄0．05)。PF4行ROC检测，其曲线下面 积为0．858，最佳工作点为1021．00，该点的敏感度为77．4％，特异度为93．3％ (YI=O．707)。 结论：本研究中共发现76种蛋白质的表达在冠心病患者和非冠心病患者之间存在 差异。参与凝血、血小板活化、补体激活及Wnt／fz信号转导通路的蛋白，可能在