果蝇组蛋白去乙酰化酶HDAC1和HDAC3选择性调控形态发生素靶基因转录研究-遗传学(眼科)专业论文.docxVIP

目录摘要1Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．。。．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．：21．前雷1．刖蟊3—1．1组蛋白乙酰化与基因转录调控31．2组蛋白去乙酰化酶(HDACs)31．3果蝇形态发生素(Morphogen)31．4果蝇HDACl和HDAC3与形态发生素靶基因转录41．5本课题的研究内容及意义52．材料与方法．62．1果蝇材料62．1．1果蝇概述62．1．2果蝇品系72．2仪器设备72．3实验试剂72．4实验原理与方法．82．4．1果蝇Gal4．UAS系统82．4．2果蝇FLP／FRT系统．。。92．4．3FLPout克隆技术．9万方数据2．4．4MARCM克隆技术．112．4．5果蝇幼虫的热激、解剖与成虫盘的免疫荧光染色．123．结果．143．1Hdac1的缺失与形态发生素靶基因的转录．143．1．1HdacI缺失不影响Wg靶基因表达．143．1．2Hdacl缺失不影响Hh靶基因表达．143．1．3HdacI缺失影响Dpp靶基因ombl掏表达143．2过表达HdacI不影响形态发生素靶基因表达153．3Hdac3的缺失与形态发生素靶基因的转录163．3．1Hdac3缺失不影响Wg下游靶基因表达．163．3．2Hdac3缺失不影响Hh下游靶基因表达．．173．3．3Hdac3缺失影u向DppF游靶基因sa胸表达173．4过表达Hdac3不影响形态发生素靶基因表达174．分析与讨论204．1去乙酰化酶对形态发生素靶基因转录的影响较为有限204．2HDACl与HDAC3的功能特异性一204．3HDACl和HDAC3选择性调控形态发生素靶基因转录一204．4HDACl与ptct掏转录．214．5HDACl与ombl掏转录．21万方数据参考文献一22致谢．24综述．25学位论文独创性声明．35万方数据温州医科大学硕士学位论文果蝇组蛋白去乙酰化酶HDACl和HDAC3选择性调控形态发生素靶基因转录摘要在真核细胞中，基因的转录需要RNA聚合酶在各转录因子的协助下进入到转录起始位点，并沿着模板DNA向下游移动，进行RNA的合成。然而，真核细胞核中的DNA会与组蛋白一起包装成核小体，核小体结构的存在，一方面阻碍了RNA聚合酶和转录因子等与DNA相应位点的结合，同时也限制了RNA聚合酶在DNA模板上的正常移动，从而会抑制转录的进行。为了解决这一问题，真核细胞利用多种途径来调节核小体的结构，使其变得松散，以保证转录的正常进行。其中，组蛋白乙酰化作用和ATP依赖的染色质重塑因子的作用是最为常见和重要的两种方式。组蛋白乙酰化作用可以中和组蛋白N端尾部的正电荷，弱化其与DNA的结合力，使核小体结构变得松散，从而为染色质重塑因子驱除核小体组蛋白创造了有利的条件。由此可知，组蛋白的乙酰化状态对于基因转录能否正常进行具有至关重要的作用。组蛋白的乙酰化状态主要由两类酶来调节，其中，组蛋白的乙酰化修饰主要由组蛋白乙酰转移酶(HistoneAcetyltransferases，HATs)来执行，这种修饰是动态的、可逆的，负责去除这种修饰作用的就是组蛋白去乙酰化酶(HistoneDeacetylases，HDACs)。由此我们可以推测，HDACs很可能会通过影响组蛋白的乙酰化状态，在基因转录过程中发挥着不可或缺的作用。为此，我们选取HDACl和HDAC3这两个去乙酰化酶，初步研究了它们在果蝇翅膀发育过程中，对形态发生素Wingless(Wg)、Hedgehog(Hh)以及Decapentaplegic(Dpp)下游靶基因的转录所可能起到的调控作用。结果发现，HDACl对Dpp下游靶基因optomotor-blind(omb)的转录具有重要的影响，HDACl功能缺失后，omb的转录显著上调；另外，HDACl对Hh下游靶基因patched(ptc)的转录也有一定影响，HDACl功能缺失后，ptc的转录有轻微的上调。而HDAC3则影响着Dpp靶基因sal的表达，HDAC3缺失后，sal的表达量有轻微的上调。结果表明，HDACl和HDAC3可以选择性地调控形态发生素下游靶基因的转录过程。关键词果蝇；HDACl；HDAC3；形态发生素；基因转录万方数据DrosophilaHistoneDeacetylases1and3SelectivelyRegulatetheTranscriptionofMorphogenTargetGenesAbstractIneukaryoticcells，duringtheprocessofgenetranscription，RNApolymeraseswillbebroughttothetranscriptionstartsitesbyaseriesoftranscripti