海洋重金属汞相关检测芯片的研发-渔业专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 独 创 性 声 明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工 作及取得研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方 外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得 宁波大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作 的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了 谢意。 若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。 签名： 日期： 关于论文使用授权的声明 本人完全了解宁波大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论 文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 （保密的论文在解密后应遵循此规定） 签名： 导师签名： 日期： 宁波 宁波大学硕士学位论文 海洋重金属汞相关检测芯片的研发 摘 要 随 着 工 农 业 经 济 的 迅 猛 发 展 ， 海 洋 环 境 质 量 恶 化 的 总 趋 势 越来越 严峻。汞 由 于 特 殊 的 物 理 化 学 性 质 和 毒 性 强 的 特 性 ， 成 为 海 洋 环 境 重 金 属 污 染 研 究 热 点。我国 近海部 分海 域汞污染 严重， 汞浓 度已高达 133 μg/L，是 I 类海 水 2600 倍 。 传 统 检 测 方 法 主 要 是 化 学 方 法 ， 存 在 依 赖 大 型 仪 器 、 操 作 专 业 性 强 等 不 足 ， 所 以 发 展 生 物 检 测 ， 开 发 理 想 的 生 物 标 记 物 是 实 现 海 洋 汞 污 染 检 测 的 前 提 和基础。 本 文根 据 目 前 我国 近 海 重金 属 汞 污 染现 状 ， 选取 的 研 究 目标 为 我 国近 海 养殖 经 济 贝 类 菲 律 宾 蛤 仔 (Venerupis philippinarum)， 采 用 微 波 消 解 -原 子 荧 光 技 术 测 定 了 鳃 组 织 中 重 金 属 汞 的 短 期 的 富 集 效 应 ， 并 分 别 从 基 因 水 平 和 蛋 白 水 平 进 行 生物 标记 物 的筛 查 。 借助 定 量 PCR 分 析 了鳃 和血 细 胞中 过 氧 化氢 酶（ CAT）、 谷胱甘肽转移酶（ GST ） 、 谷 胱 甘 肽 过 氧 化 物 酶 （ GPx ）、细胞色素 P450 （ CYP414A1 ） 、 硫 氧 还 蛋 白 （ Trx ） 、 金 属 硫 蛋 白 （ MT ） 、 热 休 克 蛋 白 （ HSP70）以及溶菌酶（ Lysozyme）在汞胁迫下的剂量和时序表达变化，测定 了 超 氧 化 物 歧 化 酶 （ SOD） 、 过 氧 化 氢 酶 （ CAT） 、 谷 胱 甘 肽 还 原 酶 （ GR）、 总谷胱甘肽含 量（ GSH）、酸性磷酸酶（ACP） 、 碱 性 磷 酸 酶（ ALP）和丙二醛 含量（ MDA） 等 的 变 化 ； 发 展 了 利 用 这 些 分 子 标 记 物 研 发 的 基 因 芯 片 用 于 环 境 检测的实 用性。 主要 研究结果 如下： （1） 鳃对汞的 富集呈 现时 间和浓度 依赖型 的模 式，在 10 μg/L 浓 度 胁迫 48 h 达到 0.308±0.04 μg/g 的最高 富集量 ，为 对照组的 21 倍（p 0.01）。 （2） 基因表达 分析结 果显 示，鳃 CYP414A1 和 GPx 基因分别 在 24 h 和 48 h 的 2.5 μg/L 暴 露组 表达显著 上调。 鳃 Lysozyme 在 24 h 的 7.5 μg/L 处 理组中 表 达显著上 调，鳃 HSP70 基因 在 48 h 的 7.5 μg/L 处 理组 中呈现 显 著下调趋 势（ p 0.01）。 鳃和血 细胞 中 HSP70 基 因表达 量 在 10 μg/L 处 理组 中 均极显著 高于对 照 组和其他 处理组 （ p 0.01）。鳃 CYP414A1 和 GPx 基因、 鳃 Lysozyme 和鳃 HSP70、 鳃 和 血 细 胞 HSP70 的 表 达 结 果 可 分 别 作 为 指 示 不 同 浓 度 汞 污 染 的 生 物 标记物， 其他基 因的 表达结果 不符合 生物 标记物的 筛选原 则。 I 海洋 海洋重金属汞相关检测芯片的研发 （3） 蛋白水平 测定结 果 表明：血细 胞 SOD 活 力在 24 2.5 μg/L 处 理被显著 抑制， 而 GR 活 力则 显著升高 （ p 0.01）。血细 胞 ALP 活 力和总 GSH 含 量分 别在 24 h 的 7.5 μg/L 和 10 μg/L 组 显著 上调。血 细胞 SOD 和 GR、 ALP