海南龙血树种质资源的初步评价-作物遗传育种专业论文.docxVIP

. 海南大学学位论文原刨性声明和使用授权说明原创性声明 海南大学学位论文原刨性声明和使用授权说明 原创性声明 本人郑重声明： 所星交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取 得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写 过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。 本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名： 董炎起 日期：硼f年f胃；o日 学位论文版权使用授权说明 本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定．即：学校有权保留并向 国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权海南大 学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存和汇编本学位论文．本人在导师指导下完成的论文成果，知识产权归属海 南大学． 保密论文在解密后遵守此规定． 论立作者签名：薹襄超 导师签名。 芦菱钍 日期： 铆1年j月3口日 日期： 初『f年歹月知日 本人已经认真阅读“CALIS高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论 文提交“CALLS高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按“章程”中规定享受相关 权益．同意论文提交后滞后：口半年；D--年；口二年发布。 论文作者签名：熏襄超 导师签名： 律辨1 日期： 伪ff年，月多。日 日期： 20”年r月多矿日 摘 摘 要 海南龙血树不仅是“血竭”的基原植物，也是一种园艺绿化树种，素有“平安树’’、 “千年不老松”等美誉。近年来，受花卉产业发展和产业结构调整的影响，海南龙血树 野生资源蕴藏量急剧减少，为对海南龙血树种质资源的保护、开发和良种选育奠定基础， 本研究从形态学、生化标记、ISSR分子标记对已收集的96份海南龙血树种质资源多样 性和亲缘关系进行了研究，此外亦对海南龙树细胞学和传粉生物学特性进行了研究。具 体实验结果如下： 1．初步建立了海南龙血树种质资源的植物性状描述规范，通过对海南龙血树的叶 长、叶宽、叶厚、叶间距等11个植物学性状的测量，聚类分析将已收集的96份海南龙 血树分为4类。 2．摸索出有效的海南龙血树基因组DNA提取方法。本研究优化了的CTAB法所提 取的基因组DNA纯度高、杂质少、完整性好，,皑260／A280介于1．7～1．9之间，能够满 足ISSR等后续实验的需要。 3．通过正交试验设计建立了海南龙血树ISSR反应体系及扩增程序。最适的209l反 应体系为：DNA模板量60ng，Mg+浓度1．5 mmol／L，dNTPs浓度O．25 mmol／L，引物浓 度1．0Ixmol／L，Taq酶用量1U：最适PCR扩增程序为：94℃预变性5 min，94℃变性 30 s，52．0 12退火45 s，72℃延伸70s，35个循环，72℃延伸8 min，4℃保存。 4．利用筛选出多态性好的10条ISSR引物对96份海南龙血树进行PCR扩增，共产 生134条DNA条带，多态性条带133条，占总条带数的99．25％；遗传相似系数(GS) 介于0．5896-0．9851，表明收集到的96份海南龙血树的遗传变异较小，在GS=O．71时， 将96份种质分为4个类群。 5．通过对形态差异较大的11份海南龙血树种质，进行POD同工酶的遗传多样性聚 类分析，可将其分为六类，分类结果和ISSR分子标记及形态学标记相接近。 6．采用染色体压片技术对海南龙血树的染色体数目和核型研究表明：在饱和对二氯 苯和0．002mol·L-18-羟基喹啉预处理中，后者预处理2h效果最好；海南龙血树核型为： 2n=2x=42=22m+20sm，“2B’’型，不对称系数为62．67％。主要由中部和近中部着丝粒染 色体组成，未观察到随体染色体。 7．对海南龙血树的花部特征和访花昆虫及访花行为、访花频率进行了研究，并对海 南龙血树的传粉方式、结实和种子萌发情况进行了检测。结果发现，海南龙血树具有虫 媒花的典型花部特征，共观测到访花昆虫5目26种，其中传粉昆虫23种，螟蛾科和夜 蛾科是主要的传粉昆虫。在自然条件下，海南龙血树的结实率差异较大，观测到的最低 为4．01％，最高为14．99％，在实验室条件下种子萌发率可达71．2％。 关键词：海南龙血树 遗传多样性 ISSR 传粉 核型分析 同工酶 AbstractD．cambodiana Abstract D．cambodiana is famous for its important economic values for using as raw materials in ornamental，medic