海藻希瓦氏菌发酵产生河豚毒素的提取与检测-水产养殖专业论文.docxVIP

海藻希瓦氏菌发酵产生河豚毒素素的提取与检测摘要 海藻希瓦氏菌发酵产生河豚毒素素的提取与检测 摘要 近年来，河豚毒素的微生物起源越来越得到人们的认可。海洋微生物发酵法 产生河豚毒素，具有原料来源广、成本低，不受季节和原料的限制，不破坏生态 平衡的特点，因此人们期望通过细菌发酵实现资源的有效利用和河豚毒素的大量 生产。国外早在上世纪80年代就已经着手此项研究，并且取得了骄人的成绩。而 我国在这方面的研究还很薄弱。 海藻希瓦氏菌最早于1 985年由Yuichi Kotati等人从红藻(Jania sp．)表面分 离出来，当时被命名为OK．1T(T---type s缸mn)，研究发现OK—lT与腐败希瓦氏菌 有很多相似的生理、生化特征，而且可以产生河豚毒素。本论文目的在于从结构 和生物学功能上证实，海藻希瓦氏菌发酵产生的T1x与河豚组织中的T]Ⅸ是一 致的，为1]Ⅸ微生物起源假说奠定坚实的实验基础。优化海藻希瓦氏菌生产河 豚毒素的发酵条件，细致研究海藻希瓦氏菌产生河豚毒素的分离纯化工作，为可 持续生产1]rX提供新思路。 本文对海藻希瓦氏菌生理生化指标进行了测定。通过测定菌体密度和菌体收 获量，研究了部分初始条件及添加不同营养物质对海藻希瓦氏菌生长的影响，采 用单因素试验和正交试验对海藻希瓦氏菌生产河豚毒素的发酵条件进行了优化。 优化后的培养基最佳配方为：在2216E培养基中添加1．0％葡萄糖、2．5％酵母粉、 1．0％磷酸高铁。统计分析，葡萄糖是影响海藻希瓦氏菌菌体收获量的主要因素。 采用SCM杯式超滤系统对海藻希瓦氏菌发酵液的过滤除杂进行了研究，考察了 操作压力对过滤效果的影响，同时还针对料液的预处理对超滤结果的影响进行了 研究，主要措施是调节料液pH值，改变其温度，在其中添加混凝剂。结果表明， 操作压力为0．2MP，通量达到最大，截留率也相对较大。料液的pH调至4，加热 料液的温度至60 4C都能使通量和截留率达到较满意的水平。研究发现在料液中添 加50m∥L硫酸铝混凝剂能有效减缓超滤膜污染。本文还考查了分子筛去除分子 量较小的杂质的效果，其中蛋白去除率50．8％，有机物去除率82．8％。考查了弱 酸性阳离子交换树脂D152对TTX的净化作用，结果显示，除色效果很好，糖类、 氨基酸类也有很好的去除效果。本文利用薄层层析对发酵产物经分离得到的rⅨ 进行初步定量，结果与小鼠生物检测法结果有良好的相关性。采用直接竞争抑制 性酶联免疫吸附试剂盒对发酵产物进行了进一步的定量测定，并最终运用高效液 海藻希瓦氏菌发酵产生河豚毒素素的提取与检测相色谱法对海藻希瓦氏菌发酵产物中的T1Ⅸ含量进行精确定性、定量。 海藻希瓦氏菌发酵产生河豚毒素素的提取与检测 相色谱法对海藻希瓦氏菌发酵产物中的T1Ⅸ含量进行精确定性、定量。 关键词：河豚毒素：海藻希瓦氏菌；发酵；提纯；检测 海藻希瓦氏菌发酵产生河豚毒素素的提取Lj检测Abstract 海藻希瓦氏菌发酵产生河豚毒素素的提取Lj检测 Abstract Nowadays，people prefer to accept the theory that bacterial is the origin of tetrodotoxin．The method using marine bacteria producing TTX has lot of advantages， such as wide source，low cost,unlimited season and material，never destroying the ecosystem balance．It is supposed to use marine bacteria fermentation to realize the efficient making use of resource and to produce of adequate TTX．It is reported that foreign scientists have done some work on this research and achieve marked success． But it has few report in Our country． Shewanella alga was frstly separated from Jania sp．by Yuichi Kotati，named OK一1 T． Shewanella alga has similar biochemical characteristics with Shewanella putrefaciens． This bacteria can producing TTX．The purpose o