转Bt基因水稻种子中Bt蛋白含量测定方法的研究.pdfVIP

2012年3月 中围粮油学报 V01．27．No．3 oftheChineseCerealsandOilsAssociation Mar．2012 第27卷第3期 Joumal 转Bt基因水稻种子中Bt蛋白含量测定方法的研究 陈笑芸 汪小福 周 育 缪青梅 方 敬 徐俊锋 (浙江省农业科学院农产品质量标准研究所，杭州310021) 摘要采用ELISA技术检测转Bt基因水稻中Bt蛋白的含量，判断水稻样品中是否含有转基因成分。 利用研磨、酶标、孵育等技术对样品进行前处理。采用阳性质控物浓度等倍稀释方法，建立标准曲线，相关系 数为0．997 4。用一系列不同转基因含量的标准基体材料，分析方法的最低检测限，灵敏度达0．1％。通过对 我国进入生产性试验的转Bt基因水稻品系邢l—l和科丰6号的测试，表明该方法与普通PCR方法真实性 和灵敏度一致，可以广泛应用于转Bt基因水稻及其粗加工产品的转基因成分检测。为转基因生物安全监管 和安全性评价提供技术支撑。 关键词Bt蛋白转基因水稻快速检测灵敏度 中图分类号：Q788文献标识码：A 文章编号：1003—0174(2012)03一012l一04 水稻作为世界主要粮食作物，也是虫害最多的 测体系。 粮食作物之一。2009年底，转基因抗虫水稻华恢l 号和转crylAb／crylAc基因抗虫水稻Bt汕优63在 1 材料和方法 湖北省生产应用的安令证书。随着转基因水稻将从 1．1 材料 小型试验逐渐走向大规模种植，给转基因生物安全 转基冈抗虫水稻品系邢l—l、科丰6号：农业 监管、追溯提出了更高的要求-lJ，快速、精准检测技 部科技发展中心；非转基因水稻品种明恢63、明恢 术体系的建立是安全监管的有效途径之一。 86：浙江省农业科学院；灵敏度检测所用标准试样： 目前，转基因生物检测技术主要分为两大 将经鉴定为转基因的水稻品系与非转基因水稻混 类旧。J，一类是基于蛋白质检测的蛋白检测技术，另 合，实验室自制。 一类是基于核酸检测的检测技术。其中ELIsA检测 Ab／lAc Bt—Cryl EusA试剂盒：美国dgdia公司。 方法是比较理想的方法。因为在EI．1sA检测中将抗Model 680酶标仪、1575洗板机：BIO—RAD公司。 原与抗体反应的特异性与酶对底物的高效催化作用 1．2方法 结合起来，从而使测定方法达到快速、简便、准确、敏 1．2．1样品前处理 感度高等特点。并且ELIsA检测既可根据颜色反应 称取磨碎的100mg样品，以1：10的比例加入样 的深浅做出定性分析，也呵通过酶标仪读数结合标 品提取液，混均后静置5min，吸取上清液加入到微 准曲线进行定量分析。陈松等一1对转Bt基因棉花 孔中。加酶标记物，室温孵育2h，洗板(莺复6—7 建立了双抗夹心ELISA定量检测方法，徐宝粱等‘¨次)，加入3，3’，5，5’一四甲基联苯胺(TMB)底物溶 用试剂盒对转基因棉子壳中Bt蛋白含量的较系统试 液，15min后，用3moL／L的硫酸溶液终止反应，用酶 验，建立了转基因Bt棉花蛋白检测技术。而快速、稳 标仪测定OD。如处的吸光值。 定、标准化的转Bt基因水稻蛋白检测方法研究较少。 1．2．2测试对照设置 本研究应用检测试剂盒，以不同转Bt基冈水稻品系 为避免试验污染而造成蛋白测试结果出现假阳 性或假阴性，进行ELISA检测时必须设置阳性对照、 为研究材料，采用ELISA方法检测水稻中Bt蛋白含 量，以期建立快速、灵敏、有效的转基因水稻蛋白检 阴性对照和空白对照。阳性对照用阳性材料前处理