谷蠹RAPD反应体系与程序的优化.pdfVIP

·34 · 粮　食　储　藏　 2011 (2) ＊ 谷蠹RAPD 反应体系与程序的优化 1 2 2 吴　芳 　余懋群 　龙　海 (1　中储粮成都粮食储藏科学研究所　成都　610031) (2　中国科学院成都生物研究所　成都　610041) 5 　　以谷蠹为研究对象, 采用 L 16 (4 ) 交组合实验和单因素梯度实验对 MgCl2 、 dN TP、 随机引物、 Taq 酶、模板 DNA 浓度和退火温度、 循环次数等影响 RA PD 扩增的重要因素进行优化, 以期建立最优的RAPD 反应体系与程序。实验结果表明:各因 素最适条件为:25μL PCR 反应体系中, 10×Buffer 2.5 μL, MgCl2 2.5 mmol/L, dN TP 0.4 mmol/L, 随机引物960 pmol/L, Taq 酶0.5 U, 模板 DNA 20 g;退火温度为37 ℃, 循环次数为45 次。在对谷蠹进行RAPD 分析时, 采用优化的反应条件, 规范实验操作, 使 用同厂家同批次的试剂, 实验结果就会具有很好的重复性和稳定性。 　谷蠹　RAPD 优化　反应体系和程序　 交组合　单因素 　　 DNA (Ra dom RA PD , Amplified Polymorphic DNA, RAPD ) , , , DNA RA PD Mg2+ 、 dN TP、 、 Taq , , DNA 、 DNA 、 、 , [1] , 。 RAPD 。 RAPD RAPD , 。 RAPD , , 。 , 1　材料与方法 DNA , 。RAPD 1.1　 [2] [3] 。 RAPD , DNA 24 h 。 , PCR 1.2　 , , RA PD :CTAB , PCR , , , dN TPs、 Taq 、 、 [4] 。 RAPD , RAPD 。, RAPD 1.3　 [5 ～7] , 1.3.1　 交组合优化 RAPD 反应体系　 。 CTA B DNA, , SBS B19 (5 ACCCCCGAAG3) 。, 。RAPD 25μL PCR [8] 2+ 1194 。 , Mg 、 dN TP、 、 Taq 。 DN A (1), ＊ :95