过氧化物酶体增殖体激活体受体γ（PPARγ）激动剂的抗动脉粥样硬化机制研究-内科学专业论文.docxVIP

过氧化轫酶体增殖体激活体受体Y(PPAR的激动剂的抗动脉粥样硬化礁型堕塞 过氧化轫酶体增殖体激活体受体Y(PPAR的激动剂的抗动脉粥样硬化礁型堕塞 主塞塑至 中 文摘要 目的：过氧化物酶体增殖体激活体受体(PPARO激动剂能抑制ApoE基因 剔除的雄性小鼠的动脉粥样硬化的形成，但其机制仍未完全明了，本研 究通过PPARt激动剂罗格列酮对高胆固醇血症兔的腹主动脉粥样硬化斑 块的干预来探讨PPAJ“激动剂对一氧化氮合酶(NOS)，基质金属蛋白酶 (MMPs)和B．钙联蛋白([3-catenin)的调控。 方法：(1)建立动物模型和分组：对照组(A组)6只兔予以正常饲料，其余 各组喂高脂饲料，2周后行腹主动脉拉伤术，术后继续每曰喂高脂饲料4 周，同时分为模型组(B组，6只)；阿托伐他汀组加用阿托伐他汀5mg／kg(C 组，6只)；罗格列酮组加用罗格列酮3mg／kg(D组，6只)；联合用药组(罗 格列酮3mg／kg和阿托伐他汀组5rag／kg(E组，6只)。(2)术前和至实验结 束时取各组兔的经耳中央动脉采血，采用氧化酶法检测血清甘油三酯 (TG)总胆固醇(TC)；实验结束后光镜标本测量血管壁的内中膜厚度。 (3)取100mg左右腹主动脉组织加入9倍匀浆介质研磨后取上清液，用一 氧化氮合酶分型试剂盒检测eNOS和iNOS的活力。(4)采用Trizol一氯仿． 异丙醇一步法提取兔的腹主动脉组织的总RNA，纯度检测合格后，取总 RNA做逆转录合成eDNA，根据各对引物所需条件进行PCR，PCR产物 经图像分析系统扫描后半定量评价表达水平。将腹主动脉剪成长lmm于 DMEM无血清培养24小时。取上清液，经明胶酶谱法和逆酶谱法测定 M^但2、MMP9、TIMPl、TIMP2的活性图像扫描分析。(5)提示各组兔 腹主动脉总蛋白后，进行电泳电转膜，用一抗和二抗进行免疫印迹反应 显色图像扫描分析检测PPAR．f和13-catenin的蛋白表达。(6)利用MMP2和 13-catenin的鼠抗人单抗进行免疫组化分析，观察其着色颗粒的变化。 结果：(1)高脂饲料喂养的各组兔于术前及实验结果时体重，血总胆固醇， 甘油三酯水平无差异，但血TG和TC较对照组显著增高。罗格列酮和联 过氧化物酶体增殖体激活体受体Y(PPAR的激动剂的抗动脉粥样硬化机制研究 过氧化物酶体增殖体激活体受体Y(PPAR的激动剂的抗动脉粥样硬化机制研究 主壅塑茎 合治疗组的内中膜厚度较模型组和阿托伐他汀组显著降低而且斑块中的 泡沫细胞更少。阿托伐他汀组的内中膜厚度与斑块中的泡沫细胞较模型 组降低。(2)模型组的eNOS活力较对照组和药物干预组显著降低。而iNOS 活力高脂饲料喂养组较对照组显著增高，虽然药物干预组的iNOS有降低 但较模型组差异无显著性。(3)药物干预组的ICAM．1、VCAM．1、eNOS、 MMP2、MMP9 mRNA水平均较模型组显著降低，而药物干预组的eNOS 均较模型组增高；但罗格列酮组未较对照组增高。高脂饲料喂养各组的 TIMP l、TIMP2 mRNA水平均较对照组增高，而PPART mRNA表达显 著增高而IB-catenin显著降低见于罗格列酮和联合用药组。(4)明胶酶谱法 示罗格列酮组和联合用药组无MMP9活性表达；而且MMP2的活性亦显 著较模型组降低。阿托伐他汀组MMP9活性虽有表达但较模型组显著降 低。(5)Western Blotting示罗格列酮和联合用药组的PPAR，蛋白表达显著 增高，而13-catenin表达则显著低于模型组和阿托伐他汀组。(6)免疫组化 示罗格列酮组和联合用药组血管壁中的MMP2及[3-catenin表达均显著低 于模型组和阿伐他汀组。 结论：1．PPAR7激动剂能显著抑制高胆固醇血症和血管损伤所致的兔腹主 动脉粥样硬化斑块的厚度及斑块中巨噬细胞的数量。2．一氧化氮合酶分 型检测示P鼢RT激动剂可以稳定血管细胞的eNOS表达，但未能显著抑 制iNOS的活力。3．PPAR．1激动剂通过抑制血管细胞mmPs的mRNA和 蛋白活性的表达是其抑制斑块形成的一个重要机制。4．PPART激活后转向 抑制9-catenin的mRNA和蛋白表达可能是其抑制MMPs表达和动脉粥 样硬化的另一重要途径。 关键词：动脉粥样硬化；过氧化物酶体增殖体激活体受体； 基质金属蛋白酶：p．钙联蛋白；一氧化氮含酶。 作 者：王育林 指导老师：杨向军 II 丝墨些望堕竺望堕竺壁堕竺墨竺!l!!!堕!堂垫型塑垫垫壁塑堂堡些塑!!型塑 丝墨些望堕竺望堕竺壁堕竺墨竺!l!!!堕!堂垫型塑垫垫壁塑堂堡些塑!!型塑 一茎壅!!曼 The research on anti。atherosclerosclerosis with Peroxisome