双波长光度法测定染料木黄酮和黄豆苷元含量.pdfVIP

2010年7月 中国粮油学报 V01．25，No．7 oftheChineseCereMsandOilsAssoeiation Jul．20110 第25卷第7期 Joumal 双波长光度法测定染料木黄酮和黄豆苷元含量 钱丽丽1 左 锋1 张永忠2 (黑龙江八一农垦大学食品学院1，大庆163319) (东北农业大学理学院国家教育部大豆生物学重点实验室2，哈尔滨150030) 摘要利用双波长法同时测定大豆异黄酮中染料木黄酮和黄豆苷元含量。经扫描测得染料木黄酮最 大吸收波长为261．6 nm，黄豆苷元最大吸收波长为249．4nm。采用双波长光度法，选用黄豆苷元的测定波长 对为249．4／272．8nm，染料木黄酮和黄豆苷元合量在波长250．2nm的等吸光点进行测定。黄豆苷元质量浓 定律。 关键词 双波长 染料木黄酮 黄豆苷元 中图分类号：TS207文献标识码：A 文章编号：1003—0174(2010)07-0117—03 大豆异黄酮是一类存在于豆科植物中的植物雌 1 材料与方法 激素，目前发现的大豆异黄酮共有12种，分为两类： 1．1材料与仪器 即游离型的苷元形式和结合型的糖苷形式大豆异黄 SP一755PC紫外分光光度计：中国上海光谱仪 酮。而游离璎的苷元形式大豆异黄酮(主要是染料 器有限公司。 木黄酮和黄豆苷元…)与人体雌激素结构相类似，固 染料木黄酮、黄豆苷元：美国Sigma公司；酸水解 赋予他具有较多的生理功能。具有缓解妇女更年期 物、酶水解物：东北农业大学国家教育部大豆生物学 综合症、抗氧化、预防骨质疏松和心血管疾病，同时 重点实验室；其他试剂均为分析纯。 对乳腺癌、前列腺癌也具有很好的疗效口。J。对于大 1．3试验方法 豆异黄酮的含量测定国外多采用HPLC法、气相色谱 1．3．1标准曲线的绘制 法以及液相色谱一质谱(HPLC—MS)和气相色谱一分别配制一定量的染料木黄酮和黄豆苷元标准 质谱(GC—MS)联用方法M“J。我国一些科研机构 溶液，用甲醇稀释至不同浓度。在选定波长下测定 也采用HPLC或气相色谱法。由于液相色谱或气相 吸光度A(以试剂空白为参比)，绘制标准曲线。 色谱虽然具有分离效果好、灵敏度高、测定结果准确 1．3．2样品处理 等优点，但样品制备步骤较多，耗时长且仪器昂贵， 精确称取大豆异黄酮酶水解物(采用约含有 从而在很大程度上限制它的使用。对于目前大部分 20％大豆异黄酮粉末作为底物，用60U大豆一葡萄 企业多采用单波长紫外分光光度法，该法虽然具有 5．0，温度45℃，水解60min)和用 糖苷酶在pH 样品制备较容易，检测快速、方便。但该法仅能粗略 4．5mol／L盐酸，在70℃下水解30min制得酸水解 检测总大豆异黄酮含量，对于游离形式染料木黄酮 物(主要为黄豆苷元和染料木黄酮)各10．00mg，甲 和黄豆苷元无法分别测定，从而无法定量判定制备 醇稀释至线形范围内测定黄豆苷元与染料木黄酮各 产品的有效成分。由于双波长光度法在选择性、灵