汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞抑制作用的研究-眼科学专业论文.docxVIP

安美霞博士论文 安美霞博士论文 ； 中文摘要 第一部分 正常球结膜与翼状胬肉成纤维细胞生长增殖状况的 对比观察 目的：对比观察在相同的培养条件下翼状胬肉与正常结膜成纤维细胞的生 长增殖状况，对两种成纤维细胞的生长增殖特性作出评价。 方法：(1)用含10％胎生牛血清的RPMI 1640培养液，在相同的培养条件 下体外培养正常球结膜与初发翼状胬肉组织成纤维细胞。 (2)倒置相差显微镜下观察体外培养的两种成纤维细胞的特点，生长增殖状 况。 (3)传第三代的翼状胬肉与正常结膜成纤维细胞，分别于接种后第二天、第 五天、第八天行噻唑蓝【3．(4，5-dimethyl一2thiaz01)一2，5--diphenyl．2H-tetrazolium bromid，MTT]比色试验，检测细胞增殖活力(细胞数)。 结果：翼状胬肉成纤维细胞较正常结膜成纤维细胞生长快，旺盛； MTT 检测结果显示：第五天翼状胬肉成纤维细胞的细胞总数多于正常结膜成纤维细 胞(pO．05)，第八天更明显(萨0．01)。 结论：翼状胬肉成纤维细胞的生长、增殖特性与正常结膜成纤维细胞不同， 明显强于正常结膜成纤维细胞，可能其为转化了的成纤维细胞。提示：治疗翼 状胬肉药物的筛选和疗效评价的实验研究应直接以翼状胬肉成纤维细胞为研究 对象，才能作出较为符合客观实际的评价。 第二部分汉防己甲素抑制翼状胬肉成纤维细胞增殖的实验研究 目的：观察汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖抑制作用并探 讨其机制，寻找治疗翼状胬肉和预防其复发的有效药物。 方法：(1)倒置相差显微镜下观察不同浓度的Tet作用下，体外培养的翼状 胬肉成纤维细胞形态的变化，并与丝裂霉素(Mitomycin，MMC)进行比较。 (2)MTT比色法测定不同浓度的Tet作用48h对体外培养的翼状胬肉成纤维 细胞增殖的抑制作用，并与MMC进行比较。 Ⅱ 安美霞博士论文 安美霞博士论文 中文摘要 (3)流式细胞仪检测不同浓度的Tet作用48h，体外培养的翼状胬肉成纤维 细胞细胞周期的变化。 结果：(1)体外培养的翼状胬肉成纤维细胞以长梭形为主，放射状排列．，Tet 作用下，细胞胞体收缩，变圆，间隙增宽，药物浓度高时，见细胞碎裂，浮起。 0．01％MMC、0．02％MMC作用下见大量细胞碎裂，溶解。 (2)不同浓度的Tet作用48h对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞的增殖均有 明显的抑制作用(萨O．01)；0．01％与0．02％MMC、4x10巧MTet与0．02％lVlMC 对翼状胬肉成纤维细胞活性的影响无显著性差异(矿0．05 oTet的IC50接近j0‘5M (为0．848x10’5 M)。 (3)流式细胞仪检测结果显示：Tet作用下，翼状胬肉成纤维细胞周期中S 期细胞增多，浓度越高，作用越明显。 结论：汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用，呈剂 量依赖性，细胞分裂被阻止在S期(DNA合成期)。可望用于对翼状胬肉的治 疗。 第三部分汉防己甲素对翼状胬肉与正常结膜成纤维细胞作用 的对比观察 目的：研究汉防己甲素对翼状胬肉和正常结膜成纤维细胞作用的异同；观 察汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase，MMP)分泌及表达的影响，以便对汉防己甲素抑制翼状胬肉 成纤维细胞的作用作出较全面评价。 方法：(1)在相同的培养条件下，传第三代的翼状胬肉与正常结膜成纤维细 胞皆加入不同浓度的Tet，分别于加药后第一天、第三天、第五天行MTT检测细 胞的存活率，并与MMC进行比较(第三天)。 (2)收集正常球结膜与初发翼状胬肉成纤维细胞培养的上清液，酶联免疫 吸附试验(Enzyme．1inked Immune sorbent Assay，ELISA)检测两种细胞培养 上清液中MMP．1、MMP．3、MMP．9的含量及10巧M的Tet作用48h翼状胬肉 成纤维细胞培养的上清液中含量的变化。 III 安美霞博士论文 安美霞博士论文 中文摘要 (3)荧光定量PCR检测lo．5M的Tet对翼状胬肉成纤维细胞MMP．3 mRNA 表达的影响。 结果：(1)用药后第一天，4x10一M Tet、2x10。5 M Tet两个浓度组对翼状胬 肉与正常结膜成纤维细胞作用情况相比，无显著性差异(矿0．05)，其余各浓度 的Tet对翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用大于正常结膜成纤维细胞，正常结膜 成纤维细胞的存活率大于翼状